应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】减少PCR错配
131/1返回列表
查看: 2155  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xwsooo

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】减少PCR错配

我在做PCR时，从电泳结果看貌似有与目的产物相同大小的片段出现，但是怀疑有的是由于错配形成的，经过提高退火温度，减少循环次数后，发现原有的有些片段消失了，可见有的是由于错配引起的假阳性，那么问题是我接下去该如何做才能减小错配发生呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-01-18 15:31:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)
★
xwsooo(金币+1):谢谢参与
这个只有用高保真性的酶了,比如 Taqplus！
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-01-18 15:36:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)
★ ★ ★
xwsooo(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2): 这2个保真酶很不错，强烈推荐~~~ 2011-01-18 21:15:08
xwsooo(金币+1): 2011-01-18 21:23:48
高保真的一般是pfu和kod，taqplus保真性很差，仅强于taq
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-01-18 15:41:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

skkyy88888

铜虫 (著名写手)
★
xwsooo(金币+1):谢谢参与
消失的片段也可能是你要的片段啊。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-01-18 16:34:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

翱宇

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★
xwsooo(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2): KOD的保真性很好，但是比较贵啊·~~ 2011-01-18 21:14:50
我习惯于用Kod-plus保真性很好，基本上没有错误的。但是有一点需要注意，你的PCR的引物有可能会错，合成的碱基数越多，越容易错。建议测序正确后，进行酶切和链接，而不要通过PCR进行亚克隆！
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-01-18 18:43:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xwsooo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by skkyy88888 at 2011-01-18 16:34:00:
消失的片段也可能是你要的片段啊。

怎么可能。。。不解。。。
回复此楼
6楼2011-01-18 21:13:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xwsooo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 翱宇 at 2011-01-18 18:43:47:
我习惯于用Kod-plus保真性很好，基本上没有错误的。但是有一点需要注意，你的PCR的引物有可能会错，合成的碱基数越多，越容易错。建议测序正确后，进行酶切和链接，而不要通过PCR进行亚克隆！

我的上游引物在18bp,下游引物22bp.我的目的序列并没有酶切位点，用的是等位基因PCR...
赞一下 回复此楼
7楼2011-01-18 21:14:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangxn2010

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
克隆基因片段我一直用PFU，貌似很贵，但是值得，测序不会出现错误。
省去了很多麻烦，建议初次做PCR还是摸一下条件（退火温度）
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-01-18 21:38:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xwsooo

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhangxn2010 at 2011-01-18 21:38:19:
克隆基因片段我一直用PFU，貌似很贵，但是值得，测序不会出现错误。
省去了很多麻烦，建议初次做PCR还是摸一下条件（退火温度）

谢谢，我的退火温度已经到了65了，貌似不能再升高了吧。。。
赞一下 回复此楼
9楼2011-01-19 11:00:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guang012345

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
学长跟我说KOD和LA的还不错
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-01-19 17:06:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
话说各种Taq都不是高保真酶
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2011-01-19 22:49:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

傻子

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引物的特异性不够和taq酶是否保真没有关系，用hotstar taq可以减少非特异性扩增
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2011-01-20 14:27:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bigboy123

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个吗，什么酶也不会完全保真的，减少突变的话，降低循环次数，缩短整个PCR过程的总时间，把PCR系统的扩增效率提高到最大，也就是这些东西。
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2011-01-20 14:48:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xwsooo 的主题更新
131/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研化学学硕调剂，一志愿985 +3 张vvvv 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:36 by houyaoxu
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
[教师之家] 焦虑 +7 水冰月月野兔 2026-03-13 9/450 2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:30 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +8 zchqwer 2026-03-10 8/400 2026-03-14 00:01 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 四川大学085601材料工程专硕 初试294求调剂 +4 祝我们好在冬天 2026-03-11 4/200 2026-03-13 21:39 by peike
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工085600调剂求老师收留 +9 jiaanl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 20:22 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 土木第一志愿276求调剂，科研和技能十分丰富，求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生，2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
[考研] 化工0817调剂 +8 灿若星晨 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:44 by 星空星月
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭