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xwsooo

银虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】减少PCR错配

我在做PCR时,从电泳结果看貌似有与目的产物相同大小的片段出现,但是怀疑有的是由于错配形成的,经过提高退火温度,减少循环次数后,发现原有的有些片段消失了,可见有的是由于错配引起的假阳性,那么问题是我接下去该如何做才能减小错配发生呢?
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xwsooo

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 翱宇 at 2011-01-18 18:43:47:
我习惯于用Kod-plus保真性很好,基本上没有错误的。但是有一点需要注意,你的PCR的引物有可能会错,合成的碱基数越多,越容易错。建议测序正确后,进行酶切和链接,而不要通过PCR进行亚克隆!

我的上游引物在18bp,下游引物22bp.我的目的序列并没有酶切位点,用的是等位基因PCR...
7楼2011-01-18 21:14:44
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查看全部 13 个回答

xwsooo(金币+1):谢谢参与
这个只有用高保真性的酶了,比如 Taqplus!
2楼2011-01-18 15:36:38
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★ ★ ★
xwsooo(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+2): 这2个保真酶很不错,强烈推荐~~~ 2011-01-18 21:15:08
xwsooo(金币+1): 2011-01-18 21:23:48
高保真的一般是pfu和kod,taqplus保真性很差,仅强于taq
3楼2011-01-18 15:41:36
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)



xwsooo(金币+1):谢谢参与
消失的片段也可能是你要的片段啊。
4楼2011-01-18 16:34:00
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