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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 【求助/交流】引物合成
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wuyuanqing

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】引物合成已有10人参与

老板给我设计的引物，共有6条，最长的一条长度为114个碱基，我问过几家公司（上海生工合成不了），都合成不了，请问有谁知哪几家公司可以合成呀？谢谢。
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1楼2011-04-11 15:14:38
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wuyuanqing

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by gbrillia at 2011-04-12 15:10:08:
可是我2010年5月的时候在金斯特合了105的引物啊，不知道你在哪里，但是济南的金斯特是可以的，至少那个时候是可以的。

我在天津。后来老板将引物修改了，109个，送上海生工了。谢谢支持。
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14楼2011-04-13 09:00:19
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wuyuanqing

金虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 永峰1230 at 2014-01-15 09:35:49
请问，上海生工设计的引物  发过来是 P6-F1  P6-F2   P6-R1   P6-R2  能看出来那两个是对应的上下游吗。...

你对照一下你自己设计的引物序列不就知道了吗。
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17楼2014-01-16 08:06:15
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
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dhd997(金币+5): good 2011-04-11 16:41:29
引用回帖:
Originally posted by wuyuanqing at 2011-04-11 15:14:38:
老板给我设计的引物，共有6条，最长的一条长度为114个碱基，我问过几家公司（上海生工合成不了），都合成不了，请问有谁知哪几家公司可以合成呀？谢谢。

现在引物合成比较好的公司有华大、invitrogen，上海生工的质量凑合，genewiz也有在做，不过114个碱基太长了，应该没有公司会给你合，一般情况下引物长度超过一定值（具体多少不清楚，大概60bp左右吧）每多合一个碱基要多收很多钱，因为在现有技术条件下每增加一个碱基引入突变的几率会成倍的增加，另外因为引物的长度随之带来的引物完整性问题也很严重（越长越容易断吗，呵呵），所以正常情况下114个碱基是可以分成两条引物来合的。
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永峰1230
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
2楼2011-04-11 15:29:07
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
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西瓜(金币+2): 高见！ 2011-04-11 17:49:11
这个引物确实有些大，不过可以分段合成。。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-04-11 15:36:38
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gbrillia

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
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西瓜(金币+2): 感谢交流 2011-04-11 17:49:28
不知道你那里有没有金斯特，济南有的，可以合成长引物
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4楼2011-04-11 15:44:43
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by gbrillia at 2011-04-11 15:44:43:
不知道你那里有没有金斯特，济南有的，可以合成长引物

根据我的了解，genescript才不会下那么大力气给你合114bp的引物
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5楼2011-04-11 15:48:48
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wuyuanqing

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-04-11 15:29:07:
现在引物合成比较好的公司有华大、invitrogen，上海生工的质量凑合，genewiz也有在做，不过114个碱基太长了，应该没有公司会给你合，一般情况下引物长度超过一定值（具体多少不清楚，大概60bp左右吧）每多合一个 ...

我是个新手，还不大懂，一条引物分成两条引物来合成那在使用时不必连接起来吧？酶切位点会有什么样的变化？谢谢。
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6楼2011-04-11 16:31:38
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
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西瓜(金币+3, EPI+1): 长见识了！您的专题不开不行了！ 2011-04-11 17:50:25
引用回帖:
Originally posted by wuyuanqing at 2011-04-11 16:31:38:
我是个新手，还不大懂，一条引物分成两条引物来合成那在使用时不必连接起来吧？酶切位点会有什么样的变化？谢谢。

比如你的这条114bp的引物咱们分成A，B两条来合成，假设是设计正向引物，A在B前面，那么在引物设计的时候你要使A引物的3’端与B引物的5'端有一段序列的重合（即overlap），一般15bp就可以了。这样先拿B和反向引物扩增得到第一轮产物，以此为模板再用A和反向引物扩增就得到你要的片段了。酶切位点放在引物的5‘端，前面加4-5个碱基当做保护碱基即可。有问题再交流，祝你好运
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7楼2011-04-11 17:19:45
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)

优秀版主
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-04-11 17:19:45:
比如你的这条114bp的引物咱们分成A，B两条来合成，假设是设计正向引物，A在B前面，那么在引物设计的时候你要使A引物的3’端与B引物的5'端有一段序列的重合（即overlap），一般15bp就可以了。这样先拿B和反向引物 ...

overlap PCR
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千万不要因为走的太久，而忘记了我们为什么出发~~~~~~ForDream~~~~~~
8楼2011-04-11 20:20:08
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tzq2011

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+3): 鼓励新虫参与交流 2011-04-11 22:50:34
可以问问百奇生物能不能做，在这一块百奇目前做得也不错。
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不断获取信息不断更新思维
9楼2011-04-11 20:29:18
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wuyuanqing

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-04-11 17:19:45:
比如你的这条114bp的引物咱们分成A，B两条来合成，假设是设计正向引物，A在B前面，那么在引物设计的时候你要使A引物的3’端与B引物的5'端有一段序列的重合（即overlap），一般15bp就可以了。这样先拿B和反向引物 ...

谢谢！
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10楼2011-04-11 21:23:10
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