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wuyuanqing

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】引物合成已有10人参与

老板给我设计的引物，共有6条，最长的一条长度为114个碱基，我问过几家公司（上海生工合成不了），都合成不了，请问有谁知哪几家公司可以合成呀？谢谢。

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1楼 2011-04-11 15:14:38

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空谷幽风

金虫 (正式写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+3, EPI+1): 长见识了！您的专题不开不行了！ 2011-04-11 17:50:25

引用回帖:

Originally posted by wuyuanqing at 2011-04-11 16:31:38:
我是个新手，还不大懂，一条引物分成两条引物来合成那在使用时不必连接起来吧？酶切位点会有什么样的变化？谢谢。

比如你的这条114bp的引物咱们分成A，B两条来合成，假设是设计正向引物，A在B前面，那么在引物设计的时候你要使A引物的3’端与B引物的5'端有一段序列的重合（即overlap），一般15bp就可以了。这样先拿B和反向引物扩增得到第一轮产物，以此为模板再用A和反向引物扩增就得到你要的片段了。酶切位点放在引物的5‘端，前面加4-5个碱基当做保护碱基即可。有问题再交流，祝你好运

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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?

7楼2011-04-11 17:19:45

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空谷幽风

金虫 (正式写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+5): good 2011-04-11 16:41:29

引用回帖:

Originally posted by wuyuanqing at 2011-04-11 15:14:38:
老板给我设计的引物，共有6条，最长的一条长度为114个碱基，我问过几家公司（上海生工合成不了），都合成不了，请问有谁知哪几家公司可以合成呀？谢谢。

现在引物合成比较好的公司有华大、invitrogen，上海生工的质量凑合，genewiz也有在做，不过114个碱基太长了，应该没有公司会给你合，一般情况下引物长度超过一定值（具体多少不清楚，大概60bp左右吧）每多合一个碱基要多收很多钱，因为在现有技术条件下每增加一个碱基引入突变的几率会成倍的增加，另外因为引物的长度随之带来的引物完整性问题也很严重（越长越容易断吗，呵呵），所以正常情况下114个碱基是可以分成两条引物来合的。

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