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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 【求助/交流】引物合成
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+3, EPI+1): 长见识了！您的专题不开不行了！ 2011-04-11 17:50:25
引用回帖:
Originally posted by wuyuanqing at 2011-04-11 16:31:38:
我是个新手，还不大懂，一条引物分成两条引物来合成那在使用时不必连接起来吧？酶切位点会有什么样的变化？谢谢。

比如你的这条114bp的引物咱们分成A，B两条来合成，假设是设计正向引物，A在B前面，那么在引物设计的时候你要使A引物的3’端与B引物的5'端有一段序列的重合（即overlap），一般15bp就可以了。这样先拿B和反向引物扩增得到第一轮产物，以此为模板再用A和反向引物扩增就得到你要的片段了。酶切位点放在引物的5‘端，前面加4-5个碱基当做保护碱基即可。有问题再交流，祝你好运
赞一下(2人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
7楼2011-04-11 17:19:45
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