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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关PCR筛引物的问题~~
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子潇杨帆

金虫 (初入文坛)

[求助] 有关PCR筛引物的问题~~

我在做分子标记筛引物的过程中，体系一定，加入不同的36条引物（单条引物，不是引物对）做36种PCR，结果只有7号管出现了一条带，其他都没有带，而且也无地毯样弥散，marker也很清晰。请问谁能给分析一下可能是什么因素造成的？引物？模板？镁离子？dNTP?Taq酶？还是可能是扩增程序的问题？
我的体系为20微升，含有模板20ng,镁离子2.5mmol/L，dNTP0.25mmol/L，Taq酶0.5U，引物0.8mmol/L,PCR Buffer2.5ul
扩增程序为：94度预变性5min;94度变性1min,50度退火1min,72度复性2min,共35个循环；72度延伸8min,4度保存~大家给看看有什么问题吗？
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1楼 2013-11-13 19:36:23
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安苏娜

新虫 (初入文坛)
有些引物的确跑不出带来。温度、循环数也都有可能影响效果。
还有就是，楼主为啥不做一个反应体系的优化？
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2楼2013-11-15 10:53:30
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子潇杨帆

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 安苏娜 at 2013-11-15 10:53:30
有些引物的确跑不出带来。温度、循环数也都有可能影响效果。
还有就是，楼主为啥不做一个反应体系的优化？

就是因为优化体系的时候没有带，全是白板才考虑是不是引物的问题，所以就多试了几条别的引物~
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3楼2013-11-16 08:05:24
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xydlengyue

金虫 (正式写手)
最近在做基因敲除  用引物跑上下游同源臂都能跑出来预计条带 胶回收上下游同源臂后 再以上臂正向引物和下臂反向引物 上下同源臂回收胶为模板 跑pcr  然后拖带很严重  求教什么原因
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篮球与科研都很重要~
4楼2019-10-24 17:37:50
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