我在做分子标记筛引物的过程中，体系一定，加入不同的36条引物（单条引物，不是引物对）做36种PCR，结果只有7号管出现了一条带，其他都没有带，而且也无地毯样弥散，marker也很清晰。请问谁能给分析一下可能是什么因素造成的？引物？模板？镁离子？dNTP?Taq酶？还是可能是扩增程序的问题？
我的体系为20微升，含有模板20ng,镁离子2.5mmol/L，dNTP0.25mmol/L，Taq酶0.5U，引物0.8mmol/L,PCR Buffer2.5ul
扩增程序为：94度预变性5min;94度变性1min,50度退火1min,72度复性2min,共35个循环；72度延伸8min,4度保存~大家给看看有什么问题吗？ |
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