应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 单引物扩增
61/1返回列表
查看: 2697  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

圣主魂

新虫 (初入文坛)

[求助] 单引物扩增 已有2人参与

测序公司说是典型的单引物扩增产物，只有上游引物：C（GGATCC）ATGCCCCCTCGC引物起作用，引物需要重新设计
我不明白的是即使是单引物扩增，也应该会有部分可以匹配上才对，可结果一点也不能和已知序列匹配。而且我送样前做的PCR和双酶切都是可以的。哎.....做个实验各种状况都能遇见，我也是醉了........
我是用的PMD19-T载体，上游引物：C（GGATCC）ATGCCCCCTCGC  括号内为bamH1内切酶位点。  下游引物：C（GAGCTC）CTAGCTCACGGTCTTGCC 括号内为Sac I内切酶位点。退火温度61度。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-10-29 10:18:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-10-30 11:31:54
圣主魂: 金币+3, ★有帮助 2014-10-31 16:04:16
测序没有结果吗？用的是载体通用引物测序吗？
如果是单引物扩增，就测不出来吗
赞一下 回复此楼
2楼2014-10-29 16:49:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

圣主魂

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by happydove at 2014-10-29 16:49:13
测序没有结果吗？用的是载体通用引物测序吗？
如果是单引物扩增，就测不出来吗

第一次测序没有结果，第二次测序公司说是单引物扩增，我刚开始对这个不太懂。
赞一下 回复此楼
3楼2014-10-31 16:03:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongdekun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

既然已经连接到载体上了，为什么不用通用引物测序？通用引物测序，正常情况一般都有测序结果的啊。
赞一下 回复此楼
4楼2014-11-02 12:45:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

圣主魂

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dongdekun at 2014-11-02 12:45:00
既然已经连接到载体上了，为什么不用通用引物测序？通用引物测序，正常情况一般都有测序结果的啊。

测序公司提供的引物， 我不知道是什么引物....测出来的结果跟我的已知序列对比，但结果完全不匹配....
赞一下 回复此楼
5楼2014-11-03 17:08:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongdekun

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 圣主魂 at 2014-11-03 17:08:14
测序公司提供的引物， 我不知道是什么引物....测出来的结果跟我的已知序列对比，但结果完全不匹配.......

1)  既然在做分子生物学这块儿，就应该知道什么载体用什么引物，常用载体和引物就那么几个，这个不是太难。。。。
2）测序的时候自己选择引物（通用引物，还是PCR引物）；根据序列长短，选择正向，反向，双向，以及加测测通等等。。。
3）拿到测序结果，可以直接跟参考序列比对。比对不成功，可以尝试查找自己的PCR引物。有可能是单引物扩增，有可能是其他非特异扩增。。。这个就看你能否找到上下游引物了。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2014-11-03 23:04:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 圣主魂 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 6/300 2026-08-06 20:19 by 苏知砚
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +3 archvillain 2026-08-06 6/300 2026-08-06 20:11 by olivermiaoer
[基金申请] 听说今天filecode变了 +12 布布和一二 2026-08-06 25/1250 2026-08-06 19:37 by wdc28
[基金申请] 基金中了 +4 laoda193707 2026-08-06 4/200 2026-08-06 18:56 by olivermiaoer
[基金申请] filecode +7 布布和一二 2026-08-06 10/500 2026-08-06 16:22 by janehuiminli
[基金申请] filecode +8 等待解的谜 2026-08-06 12/600 2026-08-06 16:11 by janehuiminli
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 12/600 2026-08-06 15:11 by eddyin
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[教师之家] 咨询面上基金 +4 李长云 2026-07-31 7/350 2026-08-06 11:20 by 李长云
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +22 低垂的野花 2026-07-31 30/1500 2026-08-05 18:03 by 低垂的野花
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[论文投稿] 十年后又回来了，论文投稿求助 +3 哈哈114477 2026-08-01 3/150 2026-08-04 15:40 by tegsgjy20
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭