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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 单引物扩增
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圣主魂

新虫 (初入文坛)

[求助] 单引物扩增 已有2人参与

测序公司说是典型的单引物扩增产物，只有上游引物：C（GGATCC）ATGCCCCCTCGC引物起作用，引物需要重新设计
我不明白的是即使是单引物扩增，也应该会有部分可以匹配上才对，可结果一点也不能和已知序列匹配。而且我送样前做的PCR和双酶切都是可以的。哎.....做个实验各种状况都能遇见，我也是醉了........
我是用的PMD19-T载体，上游引物：C（GGATCC）ATGCCCCCTCGC  括号内为bamH1内切酶位点。  下游引物：C（GAGCTC）CTAGCTCACGGTCTTGCC 括号内为Sac I内切酶位点。退火温度61度。
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1楼 2014-10-29 10:18:51
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dongdekun

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 圣主魂 at 2014-11-03 17:08:14
测序公司提供的引物， 我不知道是什么引物....测出来的结果跟我的已知序列对比，但结果完全不匹配.......

1)  既然在做分子生物学这块儿，就应该知道什么载体用什么引物，常用载体和引物就那么几个，这个不是太难。。。。
2）测序的时候自己选择引物（通用引物，还是PCR引物）；根据序列长短，选择正向，反向，双向，以及加测测通等等。。。
3）拿到测序结果，可以直接跟参考序列比对。比对不成功，可以尝试查找自己的PCR引物。有可能是单引物扩增，有可能是其他非特异扩增。。。这个就看你能否找到上下游引物了。
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6楼2014-11-03 23:04:25
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-10-30 11:31:54
圣主魂: 金币+3, ★有帮助 2014-10-31 16:04:16
测序没有结果吗？用的是载体通用引物测序吗？
如果是单引物扩增，就测不出来吗
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2楼2014-10-29 16:49:13
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圣主魂

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by happydove at 2014-10-29 16:49:13
测序没有结果吗？用的是载体通用引物测序吗？
如果是单引物扩增，就测不出来吗

第一次测序没有结果，第二次测序公司说是单引物扩增，我刚开始对这个不太懂。
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3楼2014-10-31 16:03:24
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dongdekun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

既然已经连接到载体上了，为什么不用通用引物测序？通用引物测序，正常情况一般都有测序结果的啊。
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4楼2014-11-02 12:45:00
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