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圣主魂

新虫 (初入文坛)

[求助] 单引物扩增 已有2人参与

测序公司说是典型的单引物扩增产物,只有上游引物:C(GGATCC)ATGCCCCCTCGC引物起作用,引物需要重新设计
我不明白的是即使是单引物扩增,也应该会有部分可以匹配上才对,可结果一点也不能和已知序列匹配。而且我送样前做的PCR和双酶切都是可以的。哎.....做个实验各种状况都能遇见,我也是醉了........
我是用的PMD19-T载体,上游引物:C(GGATCC)ATGCCCCCTCGC  括号内为bamH1内切酶位点。  下游引物:C(GAGCTC)CTAGCTCACGGTCTTGCC 括号内为Sac I内切酶位点。退火温度61度。
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dongdekun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

既然已经连接到载体上了,为什么不用通用引物测序?通用引物测序,正常情况一般都有测序结果的啊。
4楼2014-11-02 12:45:00
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-10-30 11:31:54
圣主魂: 金币+3, 有帮助 2014-10-31 16:04:16
测序没有结果吗?用的是载体通用引物测序吗?
如果是单引物扩增,就测不出来吗
2楼2014-10-29 16:49:13
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圣主魂

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by happydove at 2014-10-29 16:49:13
测序没有结果吗?用的是载体通用引物测序吗?
如果是单引物扩增,就测不出来吗

第一次测序没有结果,第二次测序公司说是单引物扩增,我刚开始对这个不太懂。
3楼2014-10-31 16:03:24
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圣主魂

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by dongdekun at 2014-11-02 12:45:00
既然已经连接到载体上了,为什么不用通用引物测序?通用引物测序,正常情况一般都有测序结果的啊。

测序公司提供的引物, 我不知道是什么引物....测出来的结果跟我的已知序列对比,但结果完全不匹配....
5楼2014-11-03 17:08:14
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