24小时热门版块排行榜    

查看: 2709  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

圣主魂

新虫 (初入文坛)

[求助] 单引物扩增 已有2人参与

测序公司说是典型的单引物扩增产物,只有上游引物:C(GGATCC)ATGCCCCCTCGC引物起作用,引物需要重新设计
我不明白的是即使是单引物扩增,也应该会有部分可以匹配上才对,可结果一点也不能和已知序列匹配。而且我送样前做的PCR和双酶切都是可以的。哎.....做个实验各种状况都能遇见,我也是醉了........
我是用的PMD19-T载体,上游引物:C(GGATCC)ATGCCCCCTCGC  括号内为bamH1内切酶位点。  下游引物:C(GAGCTC)CTAGCTCACGGTCTTGCC 括号内为Sac I内切酶位点。退火温度61度。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongdekun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

既然已经连接到载体上了,为什么不用通用引物测序?通用引物测序,正常情况一般都有测序结果的啊。
4楼2014-11-02 12:45:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-10-30 11:31:54
圣主魂: 金币+3, 有帮助 2014-10-31 16:04:16
测序没有结果吗?用的是载体通用引物测序吗?
如果是单引物扩增,就测不出来吗
2楼2014-10-29 16:49:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

圣主魂

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by happydove at 2014-10-29 16:49:13
测序没有结果吗?用的是载体通用引物测序吗?
如果是单引物扩增,就测不出来吗

第一次测序没有结果,第二次测序公司说是单引物扩增,我刚开始对这个不太懂。
3楼2014-10-31 16:03:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

圣主魂

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by dongdekun at 2014-11-02 12:45:00
既然已经连接到载体上了,为什么不用通用引物测序?通用引物测序,正常情况一般都有测序结果的啊。

测序公司提供的引物, 我不知道是什么引物....测出来的结果跟我的已知序列对比,但结果完全不匹配....
5楼2014-11-03 17:08:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +17 Lanmanbaby 2026-08-09 29/1450 2026-08-12 00:24 by zhanghaozhu
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3 布布和一二 2026-08-11 4/200 2026-08-11 15:20 by aasahr
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] filecode +9 documentary 2026-08-10 9/450 2026-08-11 10:08 by wk7465
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
信息提示
请填处理意见