| 查看: 904 | 回复: 2 | ||
追寻风轻扬金虫 (小有名气)
|
[求助]
重新合成的内参引物有引物二聚体该咋办？ 已有1人参与
|
|
最近在做荧光定量PCR，我之前合成的内参引物扩增样品效果还行，引物二聚体很少。后来内参引物用完了，重新合成了两管，结果再扩增，引物二聚体就很多了。做了温度梯度PCR，从57度到64度，各个温度都有引物二聚体。请问这是怎么回事呢？我的反应体系是10ul，引物加了0.5ul，模板1ul，引物浓度时10umol/L的。今天把引物稀释了4倍、16倍、32倍、64倍，结果只有稀释四倍的扩增出条带，但是还有引物二聚体。请问在不重新合成引物的情况下，还可以怎么调整条件？ PS:荧光定量的产物都是挺小的，最大也就200bp左右，我用的反应程序里面72度延伸时间是45秒，请问这会不会导致产引物二聚体增加？减少延伸时间可行吗？减少退火时间呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有168人回复
-
恩诺沙星（Enrofloxacin）科研解析：分子特征、LC-MS/MS 检测与实验室使用要点
已经有0人回复
-
Calderasib理化性质与实验操作技术笔记
已经有0人回复
-
RMC-6291怎么用？RAS(ON) 三重复合物工具化合物的实验室实操要点
已经有0人回复
-
苯并呋咱全解析：NBD 荧光衍生化试剂母核的化学特性与实验室应用
已经有0人回复
-
生物质炭与活化剂氢氧化钾混合注意事项
已经有0人回复
-
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求高人指点qpcr问题，扩增效率太高！
已经有14人回复
- 请大家帮忙看看引物二聚体的问题
已经有5人回复
- 引物二聚体会不会影响目的基因的迁移?
已经有9人回复
- 如何辨别引物之间是否能够形成引物二聚体
已经有9人回复
- PCR退火时间选择
已经有11人回复
- 引物二聚体如何识别
已经有8人回复
- 电泳图怎么全是引物二聚体？求解
已经有13人回复
- 总dna电泳有条带，但PCR后只有引物二聚体
已经有23人回复
- SYBR荧光定量的溶解曲线
已经有10人回复
- 相同条件的pcr产物，跑出不同的条带，是什么原因[/img][/img][/img]
已经有12人回复
- PCR扩不出目的基因
已经有14人回复
- 【求助/交流】有引物二聚体、非特异性扩增带是怎么回事？
已经有10人回复
- 【求助/交流】PCR引物二聚体问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】溶解曲线法及电泳法检查引物二聚体的差异
已经有13人回复
- 【求助/交流】目的基因PCR后电泳出现多条带
已经有7人回复
- 怎么扩不出来
已经有7人回复
zhaiaguan
金虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 925.7
- 散金: 30
- 帖子: 33
- 在线: 25.6小时
- 虫号: 2938093
- 注册: 2014-01-18
- 专业: 临床兽医学
2楼2014-03-18 16:04:40
jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
- MolEPI: 1
- 应助: 911 (博后)
- 金币: 17608
- 散金: 1682
- 红花: 121
- 沙发: 42
- 帖子: 14635
- 在线: 2209.7小时
- 虫号: 514340
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
3楼2014-03-18 16:51:51