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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 重新合成的内参引物有引物二聚体该咋办？
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追寻风轻扬

金虫 (小有名气)

[求助] 重新合成的内参引物有引物二聚体该咋办？ 已有1人参与

最近在做荧光定量PCR，我之前合成的内参引物扩增样品效果还行，引物二聚体很少。后来内参引物用完了，重新合成了两管，结果再扩增，引物二聚体就很多了。做了温度梯度PCR，从57度到64度，各个温度都有引物二聚体。请问这是怎么回事呢？我的反应体系是10ul，引物加了0.5ul，模板1ul，引物浓度时10umol/L的。今天把引物稀释了4倍、16倍、32倍、64倍，结果只有稀释四倍的扩增出条带，但是还有引物二聚体。请问在不重新合成引物的情况下，还可以怎么调整条件？
PS:荧光定量的产物都是挺小的，最大也就200bp左右，我用的反应程序里面72度延伸时间是45秒，请问这会不会导致产引物二聚体增加？减少延伸时间可行吗？减少退火时间呢？
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幸福只道是寻常
1楼 2013-03-07 16:49:07
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zhaiaguan

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

最好是重新合成引物吧，有引物二聚体的CT值没有可靠性
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2楼2014-03-18 16:04:40
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
2次的引物序列一样吗？
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3楼2014-03-18 16:51:51
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