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PCR的结果只有引物二聚体出来,目的片段没有。换过很多条件。求大神指导
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夏木鲁鲁
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专业: 植物生理与生化
[
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]
PCR的结果只有引物二聚体出来,目的片段没有。换过很多条件。求大神指导
已有9人参与
做的是金银花ITS2序列
体系 总25ul
mix 12.5ul
引物1 1ul
引物2 1ul
双蒸水 7.5ul
模板 3ul
下面是两个引物的条带。不过可能图倒了
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夏木鲁鲁
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1楼
2016-01-13 19:36:26
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chiemo
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注册: 2015-06-30
专业: 食品科学基础
【答案】应助回帖
感谢参与,应助指数 +1
你怎么判定是引物二聚体的?是否因为合成的引物不纯?可以试试touchdown PCR,我之前跑出来有杂带,touchdown后就只有目标序列了
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6楼
2016-01-14 10:48:41
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夏木鲁鲁
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注册: 2015-03-13
专业: 植物生理与生化
因为传图好像有限制。大家将就看(⊙o⊙)。
反应条件。预变性94c。 5min
变性94c。 30s
退火58c 30s
延伸72c 45s
共40个循环
最后延伸72c 10min
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2楼
2016-01-13 19:42:41
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夏木鲁鲁
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红花: 1
帖子: 26
在线: 10.2小时
虫号: 3735011
注册: 2015-03-13
专业: 植物生理与生化
除了58c退火以外。56 59 60 都做了。效果差不多。
体系模板2ul 3ul 4ul 5ul 都做了。结果没有什么变化
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3楼
2016-01-13 19:45:34
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金木研么么哒
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散金: 65
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帖子: 162
在线: 13.2小时
虫号: 4354794
注册: 2016-01-13
专业: 水产养殖学
【答案】应助回帖
感谢参与,应助指数 +1
没有条带的话就降温,试试56,55,54,53,52
发自小木虫Android客户端
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4楼
2016-01-13 19:51:12
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