应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR的结果只有引物二聚体出来，目的片段没有。换过很多条件。求大神指导
292/3返回列表上一页123下一页
查看: 3414  |  回复: 28
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ss2032

木虫 (正式写手)

咸鱼
引用回帖:
2楼: Originally posted by 夏木鲁鲁 at 2016-01-13 19:42:41
因为传图好像有限制。大家将就看(⊙o⊙)。
反应条件。预变性94c。  5min
                      变性94c。  30s
                      退火58c      30s
                      延伸72c       45s
共40个循环 ...

一般不是做30个循环么？？？
赞一下(1人) 回复此楼
努力翻身
11楼2016-01-14 14:52:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

狗狗狗尾巴草

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
模版浓度不是越高越好的，如果模版DNA里面有抑制剂什么的，会抑制PCR的反应，楼主可以考虑降低模版量试试。另外最好有阳性对照，如果阳性对照都P不出来的话，可以考虑换试剂
赞一下 回复此楼
12楼2016-01-14 15:23:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

快乐的生科妹

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
那个mix是缓冲液的意思吗?请问加的是哪种DNA聚合酶呢？
赞一下 回复此楼
13楼2016-01-16 00:06:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

万法唯心

新虫 (小有名气)
感觉模板加多了，加个2ul试试，退火温度试试52度和55度，另外，你目的片段多大，延伸时间是否够呢

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
14楼2016-01-16 07:07:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pengc201

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
15楼2016-01-17 01:03:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

books

木虫 (小有名气)
可以问我，我最近也做这个，刚做出来，私聊。
赞一下 回复此楼
16楼2016-01-18 16:56:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2012continue

新虫 (小有名气)
对PCR各环节都优化了还不能解决问题，就重新设计引物把，也许引物和基因组DNA配对不佳。
赞一下 回复此楼
17楼2016-01-18 21:32:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏木鲁鲁

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 反应链 at 2016-01-13 20:02:14
I think you should use a positive control, such as amplification of  housekeeping gene (Actin, etc.), which really does much help for troubleshooting.

Therefore, you should amplify a housekeeping ...

谢大神。今年放假，现在已经不做了。等来年去学校再试
赞一下 回复此楼
18楼2016-01-21 11:46:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏木鲁鲁

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by chiemo at 2016-01-14 10:48:41
你怎么判定是引物二聚体的？是否因为合成的引物不纯？可以试试touchdown PCR，我之前跑出来有杂带，touchdown后就只有目标序列了

是这样。我的目的片段大概是300bp。出来的是50bp左右。可能是引物二聚体或者非特异性扩增。我刚接触这一块，还有很多东西要学。多谢，多谢。
赞一下 回复此楼
19楼2016-01-21 11:49:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏木鲁鲁

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by noicecoola at 2016-01-14 13:35:14
先检测一下你的模板吧，排除了模板以后。再测一下你模板的浓度吧。然后按mix的说明书把引物与模板量搭配好。

多谢指点。我想可能也有这方面的问题。等来年我回学校再试试
赞一下 回复此楼
20楼2016-01-21 11:51:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 夏木鲁鲁 的主题更新
292/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ANUsWpSnuWQD 2026-08-06 4/200 2026-08-07 04:46 by nSM3ys5fefM3
[基金申请] 听说今天filecode变了 +19 布布和一二 2026-08-06 34/1700 2026-08-07 03:13 by 虫友是什么虫
[基金申请] 基金中了 +6 laoda193707 2026-08-06 6/300 2026-08-06 23:34 by dragonxp
[基金申请] filecode +10 等待解的谜 2026-08-06 14/700 2026-08-06 21:16 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +3 archvillain 2026-08-06 7/350 2026-08-06 21:05 by archvillain
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 12/600 2026-08-06 15:11 by eddyin
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[教师之家] 咨询面上基金 +4 李长云 2026-07-31 7/350 2026-08-06 11:20 by 李长云
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +22 低垂的野花 2026-07-31 30/1500 2026-08-05 18:03 by 低垂的野花
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[论文投稿] 十年后又回来了，论文投稿求助 +3 哈哈114477 2026-08-01 3/150 2026-08-04 15:40 by tegsgjy20
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭