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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR的结果只有引物二聚体出来，目的片段没有。换过很多条件。求大神指导
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夏木鲁鲁

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR的结果只有引物二聚体出来，目的片段没有。换过很多条件。求大神指导 已有9人参与

做的是金银花ITS2序列
体系 总25ul
mix 12.5ul
引物1 1ul
引物2 1ul
双蒸水 7.5ul
模板    3ul

下面是两个引物的条带。不过可能图倒了
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夏木鲁鲁

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1楼 2016-01-13 19:36:26
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夏木鲁鲁

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by chiemo at 2016-01-14 10:48:41
你怎么判定是引物二聚体的？是否因为合成的引物不纯？可以试试touchdown PCR，我之前跑出来有杂带，touchdown后就只有目标序列了

是这样。我的目的片段大概是300bp。出来的是50bp左右。可能是引物二聚体或者非特异性扩增。我刚接触这一块，还有很多东西要学。多谢，多谢。
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19楼2016-01-21 11:49:16
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夏木鲁鲁

新虫 (初入文坛)
因为传图好像有限制。大家将就看(⊙o⊙)。
反应条件。预变性94c。  5min
                      变性94c。  30s
                      退火58c      30s
                      延伸72c       45s
共40个循环
                      最后延伸72c   10min
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2楼2016-01-13 19:42:41
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夏木鲁鲁

新虫 (初入文坛)
除了58c退火以外。56 59  60  都做了。效果差不多。
体系模板2ul  3ul  4ul  5ul   都做了。结果没有什么变化
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3楼2016-01-13 19:45:34
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金木研么么哒

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没有条带的话就降温，试试56，55，54，53，52

发自小木虫Android客户端
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4楼2016-01-13 19:51:12
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