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xiatianli888金虫 (初入文坛)
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[求助]
重叠PCR电泳后出现诡异的结果，麻烦哪位高人给指导一下
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最近做重叠PCR，两个需重叠的基因分别为253bp，962bp，linker为45bp，这些基因从质粒拉出来之后都是单一条带，进行纯化后稀释10000倍，酶用的是TAKARA PrimeSTAR，98°10秒，68°60秒，延伸7分钟。体系为50微升，组成：5X PrimeSTAR Buffer (Mg2+ Plus) 10，dNTP 4，上游引物 1，下游引物 1，酶 0.3。 marker分别是5000，3000,2000,1000,750,500,250,100bp 跑20个循环的时候，是很弱的单一条带，所以被建议说跑30个循环看看，结果就出现了这个鬼（前三孔，忽略后面那个更丑的质粒吧）。。。。。而且始终感觉貌似目的基因的是两条特别相近的条带，为啥会出现这种情况呢？哪个环节可能出错了？  Administrator 2005-08-15 05hr 24min.jpg  20cycle.jpg  30cycle.jpg [ Last edited by xiatianli888 on 2015-6-17 at 15:33 ] |
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