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susannawsj

铜虫 (初入文坛)

[求助] 点突变PCR电泳检测不出目标条带 已有2人参与

我的点突变质粒为pET28   引物根据说明书设计 37bp,Tm78.2
PCR程序根据说明书上说的
95度 30s 1cycle
95度 30s  12cycles
55度  1min
68度  6min30s(质粒为6200bp)
同时我也试过退火温度76度
操作都是按照说明书上做的,但两种情况都没有P处目标条带(我的电泳上样有30uL了),全是引物二聚体,转化也没做出来,这是为什么呢?
求指教!!
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
请问使用什么试剂盒可以检测点突变?
2楼2015-06-01 13:59:12
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cystrr

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
susannawsj: 金币+8, ★★★很有帮助 2015-06-01 18:19:17
预变性时间可以增加5-10min,变形时间也可以增加,这样可以使完全互补的两条引物完全分离,可以降低形成引物二聚体的几率
3楼2015-06-01 15:12:06
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