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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 点突变PCR电泳检测不出目标条带
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susannawsj

铜虫 (初入文坛)

[求助] 点突变PCR电泳检测不出目标条带 已有2人参与

我的点突变质粒为pET28   引物根据说明书设计 37bp，Tm78.2
PCR程序根据说明书上说的
95度 30s 1cycle
95度 30s  12cycles
55度  1min
68度  6min30s（质粒为6200bp）
同时我也试过退火温度76度
操作都是按照说明书上做的，但两种情况都没有P处目标条带（我的电泳上样有30uL了），全是引物二聚体，转化也没做出来，这是为什么呢？
求指教！！
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1楼 2015-06-01 11:12:46
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
请问使用什么试剂盒可以检测点突变？
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2楼2015-06-01 13:59:12
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cystrr

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
susannawsj: 金币+8, ★★★很有帮助 2015-06-01 18:19:17
预变性时间可以增加5-10min，变形时间也可以增加，这样可以使完全互补的两条引物完全分离，可以降低形成引物二聚体的几率
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2015-06-01 15:12:06
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