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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌落PCR的条带比目标基因要大
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慢慢的路过

铜虫 (初入文坛)

[求助] 菌落PCR的条带比目标基因要大 已有3人参与

最近做了菌落PCR，出现了很莫名的结果，想向大家咨询一下

图里泳道1，2都是用自己设计的引物P出来的目标基因 ，3-8是菌落PCR的结果。泳道4的是正确的目标基因，已经测过序了。

泳道5.7.8都比目标基因要大一截，我想咨询一下大家这是为什么。

菌落PCR的条带比目标基因要大
H菌落PCR 1，2参照，3-8菌落.jpg
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1楼 2015-06-01 10:00:13
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1. 污染，连接了非目的片段。
2. 目的基因的可变剪切片段。
3. 目的基因核苷酸序列构象发生变化，这种情况很少。

都需要测序验证。
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2楼2015-06-01 14:09:06
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calorimetry

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
扩增出比目的基因更大片段的DNA，最可能是模板不纯，或者发生了污染。最简单的处理办法，直接把电泳中纯的目的DNA的电泳带切下来，然后溶解凝胶后回收出其中的DNA，就用后者直接扩增，如果是电泳出来带显示是纯的，就不要去找什么原因了，就用此纯模板扩增就行了。
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3楼2015-06-01 14:15:17
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
感谢参与，应助指数 +1
请问你pcr扩增的引物都是一样的吗，
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4楼2015-06-01 15:46:38
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