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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 菌落PCR有目的条带，质粒提取后质量良好，可是质粒PCR却没有目的条带
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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)

[求助] 菌落PCR有目的条带，质粒提取后质量良好，可是质粒PCR却没有目的条带

我提取质粒后跑电泳，条带比5微升 的marker亮一点，然后用15微升体系做质粒pcr，质粒添加量为0.3微升，结果P不出目的基因，这是怎么回事
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1楼 2014-07-04 14:26:50
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-04 23:10:59
做好对照才好找原因啊，你这样子简单一说别人也没法给你找到底哪的问题。有没有阳性对照，如果连阳性对照都出问题了，那就是你体系出问题了。如果阳性对照没问题，那就看质粒提取是否有问题。一般菌P高亮的话，只要质粒提取没有问题，那质粒pcr一般是没有问题的

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天道酬勤
2楼2014-07-04 15:50:10
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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2014-07-04 15:50:10
做好对照才好找原因啊，你这样子简单一说别人也没法给你找到底哪的问题。有没有阳性对照，如果连阳性对照都出问题了，那就是你体系出问题了。如果阳性对照没问题，那就看质粒提取是否有问题。一般菌P高亮的话，只要 ...

阳性对照药怎么做呢，我刚开始做分子实验，还是新手，多多指点啊
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3楼2014-07-04 16:16:08
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
★ ★
蓝色泡沫321(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-05 19:01:11
引用回帖:
3楼: Originally posted by 蓝色泡沫321 at 2014-07-04 16:16:08
阳性对照药怎么做呢，我刚开始做分子实验，还是新手，多多指点啊...

就是用你扩基因时候的东西做模板（含有这个基因的重组载体或者cDNA），目的就是为了排除不是你pcr体系造成的质粒pcr扩不出来。简单的说，要不就是你pcr扩增是少加了东西，要不就是你质粒没有提出来。所以做好对照你才能排除原因

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天道酬勤
4楼2014-07-04 16:33:59
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考拉003

新虫 (小有名气)
试试25ul体系，模版加到1ul
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不是微生物专业的却进入微生物行业
5楼2014-07-05 04:38:32
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