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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 同一个质粒的PCR结果和做出这个质粒的原来的RT-PCR结果不一样，什么原因呢？？
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haitai2011

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1楼 2013-07-09 11:16:02
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jilly

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137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-10 21:36:19
haitai2011: 金币+5 2013-07-11 21:01:24
RT-PCR结果和预期的一样吗？
出现这种结果，要是RT-PCR结果和预期的一样的话，有可能质粒是假阳，可用酶切鉴定一下，会不会有目的条带出来，PCR比较容易出现假阳。最准备的鉴定就是测序了
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2楼2013-07-10 10:38:57
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haitai2011

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3楼2013-07-10 21:05:55
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jilly

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关键是双酶切的小带和你的目的片段大小是不是一样的？不是一样的话，说明质粒是假阳了。再不放心的话，可测序
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4楼2013-07-11 02:00:23
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haitai2011

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5楼2013-07-11 10:33:38
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zhouking8758

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难道片段和质粒发生重组？
我遇到过质粒和E.coli 的基因组发生重组的现象。
可以先测序看看序列。
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6楼2013-07-11 12:11:46
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haitai2011

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7楼2013-07-11 21:00:45
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jilly

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3楼: Originally posted by haitai2011 at 2013-07-10 21:05:55
双酶切的两条带 之和 和质粒的条带一样大，pcr也p亮了，但是就是和RT-PCR 结果不一样的...

双酶切的两条带之和，肯定会和质粒的条带一样
我觉得你这个质粒有九成是假阳性的
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8楼2013-07-12 08:45:16
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zhouking8758

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5楼: Originally posted by haitai2011 at 2013-07-11 10:33:38
和我想要的目的条带不一样呢  差了快1000bp了
但是质粒PCR却P亮了...

质粒PCR的带和预期大小的带相差了1000bp，也有可能是质粒在细菌内增殖过程中发生了缺失。
前面我也说过，有可能是发生了重组。
这些情况我都遇到过。
只有测序才知道差的是哪一段以及其他详细信息。
另外，我不大赞同你的RT过程的问题。
你克隆肯定是RT后再PCR，得到正确长度的片段才进行后续的克隆，所以问题应该在克隆这一步，而不会与RT有关。
最后祝你实验顺利。
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9楼2013-07-12 10:33:33
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