同一个质粒的PCR结果和做出这个质粒的原来的RT-PCR结果不一样，什么原因呢？？ - 生物科学

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haitai2011

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1楼 2013-07-09 11:16:02

已阅关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

zhouking8758

木虫 (正式写手)

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引用回帖:

5楼: Originally posted by haitai2011 at 2013-07-11 10:33:38
和我想要的目的条带不一样呢差了快1000bp了
但是质粒PCR却P亮了...

质粒PCR的带和预期大小的带相差了1000bp，也有可能是质粒在细菌内增殖过程中发生了缺失。
前面我也说过，有可能是发生了重组。
这些情况我都遇到过。
只有测序才知道差的是哪一段以及其他详细信息。
另外，我不大赞同你的RT过程的问题。
你克隆肯定是RT后再PCR，得到正确长度的片段才进行后续的克隆，所以问题应该在克隆这一步，而不会与RT有关。
最后祝你实验顺利。