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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 一个质粒多个位点如何突变
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limeiliang

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1楼 2012-06-27 10:02:12
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c3024034

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果你想将TTT为TCG，可以设计一条引物将其同时突变，没问题的 ，相差几个的碱基都可以设计在同一条引物上的
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2楼2012-06-27 10:57:48
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genegop

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以试试QuikChange® Multi Site-Directed Mutagenesis，https://www.google.com.hk/search ... biw=960&bih=523
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4楼2012-06-27 12:30:31
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ilxly

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-27 14:56:29
有专门做点突变的酶或者试剂盒
比如quick change kit 和KOD Plus PCR酶
做起来很快的 比普通的PCR还要简单
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5楼2012-06-27 14:08:32
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ilxly

木虫 (小有名气)
还有就是你要多次点突变载体上的目的基因后，可以再次把这段基因双酶切下来连接到初始载体上就一切OK了，防止载体上序列出问题
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6楼2012-06-27 14:10:15
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easonyshen

银虫 (小有名气)
★ ★
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小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-28 15:48:45
quikchange multi是这种问题最快最方便的解决法， 用他们提供的网络程序设计引物，基本每次反应都没什么问题。 而且Quikchange是在整个质粒上突变，就省去了酶切和连接的步骤。
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7楼2012-06-28 04:52:00
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limeiliang

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8楼2012-07-01 09:20:19
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limeiliang

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9楼2012-07-01 09:21:41
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limeiliang

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10楼2012-07-01 09:22:03
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艰苦温度

新虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
10楼: Originally posted by limeiliang at 2012-07-01 09:22:03
我想一次突变好几个分散的碱基 行吗 有做过没有啊...

我最近 也在做点突变，一次需要变两个碱基，中间间隔30bp，可以在一条引物上设计两个点突变吗？你做个这种类似的实验吗？或者有前辈路过吗？求指导！
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11楼2014-05-28 23:19:33
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strive1231233楼
2012-06-27 11:38  
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