24小时热门版块排行榜    

查看: 1528  |  回复: 6

canfeng2008

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求多位点突变的技巧及步骤

RT,我准备做3个位点的突变,也看了一些资料及步骤,引物也设计好了,但还是没有最后定下按什么方法及步骤来做,请高手推荐下步骤,谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linysm

银虫 (小有名气)

先克隆到一个小片段载体上,然后设计含突变位点的引物,用PCR完成突变,再克隆。
2楼2010-09-07 09:15:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

canfeng2008

银虫 (正式写手)

我有构建好的野生型的表达载体质粒,引物也设计好了,就是想参考一下实验的步骤,谢谢
3楼2010-09-07 09:24:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫


silicare(金币+1):谢谢参与 2010-09-07 11:51:47
这个 你去下几个硕博士论文来看看就知道了。其实很简单。
做突变最重要的是去模板,因为模板时没有突变的。去模板要用Dpn1。一定要保证去干净很重要。
仕不可不弘毅,任重而道远
4楼2010-09-07 10:03:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biotech113

铜虫 (初入文坛)

Overlapping 的手段就可以,只不过每一轮PCR完了后都得胶回收(避免之前模版的干扰),详见分子克隆
不抛弃,不放弃!
5楼2010-09-07 10:47:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

canfeng2008

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 墨香若水 at 2010-09-07 10:03:33:
这个 你去下几个硕博士论文来看看就知道了。其实很简单。
做突变最重要的是去模板,因为模板时没有突变的。去模板要用Dpn1。一定要保证去干净很重要。

我找了,但是找到多点突变的硕博论文很难,找了一天没找到合适的,才上来求助的
6楼2010-09-07 12:15:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

canfeng2008

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by biotech113 at 2010-09-07 10:47:19:
Overlapping 的手段就可以,只不过每一轮PCR完了后都得胶回收(避免之前模版的干扰),详见分子克隆

嗯,是的,我看过这个方法,如果没有更合适的也打算选这个方法来做。
7楼2010-09-07 12:17:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 canfeng2008 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode +5 等待解的谜 2026-08-06 7/350 2026-08-06 13:21 by 苏知砚
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +3 Tide man 2026-08-06 4/200 2026-08-06 13:08 by loufangrui
[基金申请] filecode +3 布布和一二 2026-08-06 5/250 2026-08-06 13:00 by 且听虎啸
[基金申请] 求各位大神看下 100+5 hpkpkpkp 2026-08-05 31/1550 2026-08-06 12:34 by yang182083
[教师之家] 咨询面上基金 +4 李长云 2026-07-31 7/350 2026-08-06 11:20 by 李长云
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备? 50+3 kf2781974 2026-07-31 11/550 2026-08-05 19:16 by kf2781974
[基金申请] 面上再次挂了,太难了,躺也躺不了,倦也卷不过,小学校之殇! +22 低垂的野花 2026-07-31 30/1500 2026-08-05 18:03 by 低垂的野花
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[高分子] UV压敏胶开发 +5 ichall 2026-07-30 7/350 2026-08-05 08:36 by 一痕胶色
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[论文投稿] 十年后又回来了,论文投稿求助 +3 哈哈114477 2026-08-01 3/150 2026-08-04 15:40 by tegsgjy20
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息,有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
[基金申请] 什么时候能放榜呀? +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +16 布布和一二 2026-07-30 22/1100 2026-08-03 09:20 by gy116024
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
信息提示
请填处理意见