应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求多位点突变的技巧及步骤
71/1返回列表
查看: 1562  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

canfeng2008

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求多位点突变的技巧及步骤

RT，我准备做3个位点的突变，也看了一些资料及步骤，引物也设计好了，但还是没有最后定下按什么方法及步骤来做，请高手推荐下步骤，谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-09-07 08:16:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linysm

银虫 (小有名气)
先克隆到一个小片段载体上，然后设计含突变位点的引物，用PCR完成突变，再克隆。
赞一下 回复此楼
2楼2010-09-07 09:15:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

canfeng2008

银虫 (正式写手)
我有构建好的野生型的表达载体质粒，引物也设计好了，就是想参考一下实验的步骤，谢谢
赞一下 回复此楼
3楼2010-09-07 09:24:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫
★
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-09-07 11:51:47
这个 你去下几个硕博士论文来看看就知道了。其实很简单。
做突变最重要的是去模板，因为模板时没有突变的。去模板要用Dpn1。一定要保证去干净很重要。
赞一下(1人) 回复此楼
仕不可不弘毅，任重而道远
4楼2010-09-07 10:03:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biotech113

铜虫 (初入文坛)
Overlapping 的手段就可以，只不过每一轮PCR完了后都得胶回收（避免之前模版的干扰），详见分子克隆
赞一下 回复此楼
不抛弃，不放弃！
5楼2010-09-07 10:47:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

canfeng2008

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 墨香若水 at 2010-09-07 10:03:33:
这个 你去下几个硕博士论文来看看就知道了。其实很简单。
做突变最重要的是去模板，因为模板时没有突变的。去模板要用Dpn1。一定要保证去干净很重要。

我找了，但是找到多点突变的硕博论文很难，找了一天没找到合适的，才上来求助的
赞一下 回复此楼
6楼2010-09-07 12:15:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

canfeng2008

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by biotech113 at 2010-09-07 10:47:19:
Overlapping 的手段就可以，只不过每一轮PCR完了后都得胶回收（避免之前模版的干扰），详见分子克隆

嗯，是的，我看过这个方法，如果没有更合适的也打算选这个方法来做。
赞一下 回复此楼
7楼2010-09-07 12:17:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 canfeng2008 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 05:35 by LH5NkK5Ud4bh
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 05:15 by LH5NkK5Ud4bh
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 5/250 2026-09-16 05:03 by LH5NkK5Ud4bh
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-16 04:23 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-16 02:50 by DgNGHc3h5tPl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-16 02:23 by DgNGHc3h5tPl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:59 by zNcEhTcH7ihq
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:47 by zNcEhTcH7ihq
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 0pYnUiPDfdnk 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:35 by CgyNCDVNhGVg
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:50 by CgyNCDVNhGVg
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-15 16:26 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-15 15:14 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 14:34 by VMDqgnlKimtZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:14 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:50 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-15 06:49 by 5BDX0d0WFp7t
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-14 23:24 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:25 by vZfe6xYu34yj
[基金申请] 求教各位大神：2026教育部人文社科青年基金项目何时公示呀？ +5 云宴山人 2026-09-10 7/350 2026-09-14 12:11 by ecnu2013
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭