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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求多位点突变的技巧及步骤
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canfeng2008

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求多位点突变的技巧及步骤

RT，我准备做3个位点的突变，也看了一些资料及步骤，引物也设计好了，但还是没有最后定下按什么方法及步骤来做，请高手推荐下步骤，谢谢
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1楼 2010-09-07 08:16:30
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linysm

银虫 (小有名气)
先克隆到一个小片段载体上，然后设计含突变位点的引物，用PCR完成突变，再克隆。
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2楼2010-09-07 09:15:11
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canfeng2008

银虫 (正式写手)
我有构建好的野生型的表达载体质粒，引物也设计好了，就是想参考一下实验的步骤，谢谢
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3楼2010-09-07 09:24:14
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫
★
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-09-07 11:51:47
这个 你去下几个硕博士论文来看看就知道了。其实很简单。
做突变最重要的是去模板，因为模板时没有突变的。去模板要用Dpn1。一定要保证去干净很重要。
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仕不可不弘毅，任重而道远
4楼2010-09-07 10:03:33
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biotech113

铜虫 (初入文坛)
Overlapping 的手段就可以，只不过每一轮PCR完了后都得胶回收（避免之前模版的干扰），详见分子克隆
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不抛弃，不放弃！
5楼2010-09-07 10:47:19
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canfeng2008

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 墨香若水 at 2010-09-07 10:03:33:
这个 你去下几个硕博士论文来看看就知道了。其实很简单。
做突变最重要的是去模板，因为模板时没有突变的。去模板要用Dpn1。一定要保证去干净很重要。

我找了，但是找到多点突变的硕博论文很难，找了一天没找到合适的，才上来求助的
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6楼2010-09-07 12:15:12
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canfeng2008

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by biotech113 at 2010-09-07 10:47:19:
Overlapping 的手段就可以，只不过每一轮PCR完了后都得胶回收（避免之前模版的干扰），详见分子克隆

嗯，是的，我看过这个方法，如果没有更合适的也打算选这个方法来做。
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7楼2010-09-07 12:17:13
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