24小时热门版块排行榜    

查看: 1330  |  回复: 6

canfeng2008

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】求多位点突变的技巧及步骤

RT,我准备做3个位点的突变,也看了一些资料及步骤,引物也设计好了,但还是没有最后定下按什么方法及步骤来做,请高手推荐下步骤,谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linysm

银虫 (小有名气)

先克隆到一个小片段载体上,然后设计含突变位点的引物,用PCR完成突变,再克隆。
2楼2010-09-07 09:15:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

canfeng2008

银虫 (正式写手)

我有构建好的野生型的表达载体质粒,引物也设计好了,就是想参考一下实验的步骤,谢谢
3楼2010-09-07 09:24:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫


silicare(金币+1):谢谢参与 2010-09-07 11:51:47
这个 你去下几个硕博士论文来看看就知道了。其实很简单。
做突变最重要的是去模板,因为模板时没有突变的。去模板要用Dpn1。一定要保证去干净很重要。
仕不可不弘毅,任重而道远
4楼2010-09-07 10:03:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biotech113

铜虫 (初入文坛)

Overlapping 的手段就可以,只不过每一轮PCR完了后都得胶回收(避免之前模版的干扰),详见分子克隆
不抛弃,不放弃!
5楼2010-09-07 10:47:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

canfeng2008

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 墨香若水 at 2010-09-07 10:03:33:
这个 你去下几个硕博士论文来看看就知道了。其实很简单。
做突变最重要的是去模板,因为模板时没有突变的。去模板要用Dpn1。一定要保证去干净很重要。

我找了,但是找到多点突变的硕博论文很难,找了一天没找到合适的,才上来求助的
6楼2010-09-07 12:15:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

canfeng2008

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by biotech113 at 2010-09-07 10:47:19:
Overlapping 的手段就可以,只不过每一轮PCR完了后都得胶回收(避免之前模版的干扰),详见分子克隆

嗯,是的,我看过这个方法,如果没有更合适的也打算选这个方法来做。
7楼2010-09-07 12:17:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 canfeng2008 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +4 弗格个 2026-02-28 6/300 2026-02-28 22:00 by wang_dand
[考研] 292求调剂 +3 yhk_819 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:57 by gaoxiaoniuma
[考研] 290求调剂 +5 材料专硕调剂; 2026-02-28 6/300 2026-02-28 21:40 by gaoxiaoniuma
[考博] 26申博 +4 想申博! 2026-02-26 4/200 2026-02-28 21:37 by limorning
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 求调剂 +4 repeatt?t 2026-02-28 4/200 2026-02-28 21:16 by gaoxiaoniuma
[考研] 高分子化学与物理调剂 +4 好好好1233 2026-02-28 7/350 2026-02-28 20:42 by 好好好1233
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[考研] 285求调剂 +5 满头大汗的学生 2026-02-28 5/250 2026-02-28 18:10 by 材料专硕调剂;
[考博] 博士自荐 +3 kkluvs 2026-02-28 3/150 2026-02-28 16:59 by StarAura
[考研] 0856调剂 +3 刘梦微 2026-02-28 3/150 2026-02-28 13:22 by houyaoxu
[考研] 寻找调剂 +3 LYidhsjabdj 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:59 by miniwendy
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 9/450 2026-02-28 12:32 by seaskyy
[考研] 272求调剂 +3 田智友 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:31 by 王加浩to
[基金申请] 面上可以超过30页吧? +12 阿拉贡aragon 2026-02-22 13/650 2026-02-26 22:09 by Hahaxia
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
请填处理意见