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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)

[求助] 菌落PCR有目的条带,质粒提取后质量良好,可是质粒PCR却没有目的条带

我提取质粒后跑电泳,条带比5微升 的marker亮一点,然后用15微升体系做质粒pcr,质粒添加量为0.3微升,结果P不出目的基因,这是怎么回事
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-04 23:10:59
做好对照才好找原因啊,你这样子简单一说别人也没法给你找到底哪的问题。有没有阳性对照,如果连阳性对照都出问题了,那就是你体系出问题了。如果阳性对照没问题,那就看质粒提取是否有问题。一般菌P高亮的话,只要质粒提取没有问题,那质粒pcr一般是没有问题的

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天道酬勤
2楼2014-07-04 15:50:10
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蓝色泡沫321

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 随风飘摇11 at 2014-07-04 15:50:10
做好对照才好找原因啊,你这样子简单一说别人也没法给你找到底哪的问题。有没有阳性对照,如果连阳性对照都出问题了,那就是你体系出问题了。如果阳性对照没问题,那就看质粒提取是否有问题。一般菌P高亮的话,只要 ...

阳性对照药怎么做呢,我刚开始做分子实验,还是新手,多多指点啊
3楼2014-07-04 16:16:08
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

★ ★
蓝色泡沫321(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-05 19:01:11
引用回帖:
3楼: Originally posted by 蓝色泡沫321 at 2014-07-04 16:16:08
阳性对照药怎么做呢,我刚开始做分子实验,还是新手,多多指点啊...

就是用你扩基因时候的东西做模板(含有这个基因的重组载体或者cDNA),目的就是为了排除不是你pcr体系造成的质粒pcr扩不出来。简单的说,要不就是你pcr扩增是少加了东西,要不就是你质粒没有提出来。所以做好对照你才能排除原因

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天道酬勤
4楼2014-07-04 16:33:59
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考拉003

新虫 (小有名气)

试试25ul体系,模版加到1ul
不是微生物专业的却进入微生物行业
5楼2014-07-05 04:38:32
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