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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于质粒载体PCR目的基因片段大小的要求
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monkey_pxs

金虫 (小有名气)

[求助] 关于质粒载体PCR目的基因片段大小的要求 已有3人参与

我设计了引物，准备用pUC-18做克隆载体，但是pUC-18的大小为2686bp,我需要克隆的目的基因片段有2932bp，请问能做吗，还有，这样2932bp的基因片段是不是太长了点，选择载体的时候有什么规则和要求，另外，我克隆载体和表达载体用一个可以不？
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人只有在真正做事过程中才会明白以前想的那些压抑难受什么的都是太闲了想多了的结果。
1楼 2014-10-14 11:04:44
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
★
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kx444555: 鼓励交流 2014-10-15 11:28:02
我个人觉得载体片段这样可以做，载体不宜大，片段不宜大。
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2楼2014-10-14 11:19:21
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monkey_pxs

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-10-14 11:19:21
我个人觉得载体片段这样可以做，载体不宜大，片段不宜大。

但是我的目的基因片段都超过我的载体大小了，不会有影响吗？
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人只有在真正做事过程中才会明白以前想的那些压抑难受什么的都是太闲了想多了的结果。
3楼2014-10-14 11:44:19
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jian212

铜虫 (小有名气)
★
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kx444555: 鼓励交流 2014-10-15 11:28:07
你怎么长的片段直接可以往表达载体里做了
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学习再学习，努力再努力。
4楼2014-10-14 15:11:32
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monkey_pxs

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jian212 at 2014-10-14 15:11:32
你怎么长的片段直接可以往表达载体里做了

恩，对啊，所以我才想到用pUC-18既做克隆载体，又直接去表达，但是还是担心片段过长啊，所以来咨询下虫友们的意见~
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人只有在真正做事过程中才会明白以前想的那些压抑难受什么的都是太闲了想多了的结果。
5楼2014-10-14 15:22:44
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by monkey_pxs at 2014-10-14 11:44:19
但是我的目的基因片段都超过我的载体大小了，不会有影响吗？...

这个没有影响
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6楼2014-10-14 17:27:22
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852634230

新虫 (初入文坛)
★
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kx444555: 鼓励交流 2014-10-15 11:28:10
这个没有问题的，连中间载体做酶切的时候要把目的片段和载体跑开，然后回收目的片段连終载。
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今日你对我爱答不理，明天让你高攀不起
7楼2014-10-15 10:27:49
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monkey_pxs

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 852634230 at 2014-10-15 10:27:49
这个没有问题的，连中间载体做酶切的时候要把目的片段和载体跑开，然后回收目的片段连終载。

好的，谢谢
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人只有在真正做事过程中才会明白以前想的那些压抑难受什么的都是太闲了想多了的结果。
8楼2014-10-15 16:30:49
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zhangzhe1820

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by monkey_pxs at 2014-10-14 11:44:19
但是我的目的基因片段都超过我的载体大小了，不会有影响吗？...

一般目的片段不超过载体长度的10%是没有问题的
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9楼2014-10-17 10:19:13
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zhuimengyin

新虫 (初入文坛)
可以是可以但酶切回收片段时不怎么好操作，多跑会儿，一般大小差不多的，跑个90分钟
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10楼2014-10-17 20:05:38
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