24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3240  |  回复: 13

雪中花sml

新虫 (小有名气)

[求助] 空质粒做PCR也能P出目的条带 已有6人参与

最近构建质粒,在筛选的过程中发现空质粒作模板也能P出我的目的基因条带,无法有效筛选重组的质粒,求大神帮忙解决这种问题
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

向着前方迈进
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-06-01 22:53:04
有两种可能:第一你不能肯定P出来的就是你的目的条带把,只是大小差不多(应该没测序验证)可能是载体上的错配,再就是你的pcr产物没连进去,但是在转化的过程中还是和菌混在一起了,也有这种可能P出来,以前也经常遇到P出来有条带,但是测序是空载的情况,暂时只能这么解释。如果有大神有更好的解释,请告知
2楼2015-05-29 22:45:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雪中花sml

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by a13515517892 at 2015-05-29 22:45:34
有两种可能:第一你不能肯定P出来的就是你的目的条带把,只是大小差不多(应该没测序验证)可能是载体上的错配,再就是你的pcr产物没连进去,但是在转化的过程中还是和菌混在一起了,也有这种可能P出来,以前也经常 ...

我是每次做菌落PCR和提质粒都能P出来,双酶切就切不开,测序也是空载体
向着前方迈进
5楼2015-05-30 12:56:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LuM_QD

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-06-01 22:54:21
你做连接的产物里有你的insert,你转化后铺在平板上,你的insert DNA也在平板上,注意哦,大部分的insert没有连上载体里,就这么铺在平板表面,你养了一晚上,这些DNA也没有被降解,所以 很容易pcr出来。建议用载体上的引物试一下,效果会很准确

[ 发自小木虫客户端 ]
呵呵
10楼2015-05-30 14:01:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-06-01 22:54:54
LZ你PCR体系污染的可能性是不小的
1.你最初是想用空载质粒做阴性对照,转化子的筛选是用菌落PCR来做的吧,若以已经提好的空质粒为模板能扩出来与你基因大小相同的序列,若带型清晰的话,污染的可能性非常的大。
2.建议用你补齐PCR体系中所用的dd水做模板做一个阴性对照筛查一下PCR体系是否有污染。
大家相互帮助哈
3楼2015-05-30 00:22:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小手铐

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-01 22:55:14
我也遇到这种情况,做菌液PCR的时候P不出条带(同时做了阳性对照和阴性对照,阳性的扩出来,阴性的P不出来),然后把P不出来的菌液提质粒,做质粒PCR,可以P出来(也做了阳性和阴性对照,阳性扩出,阴性P不出),最后把质粒送去测序,测序结果是空载。郁闷死了。
4楼2015-05-30 09:09:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雪中花sml

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by luwei13566 at 2015-05-30 00:22:12
LZ你PCR体系污染的可能性是不小的
1.你最初是想用空载质粒做阴性对照,转化子的筛选是用菌落PCR来做的吧,若以已经提好的空质粒为模板能扩出来与你基因大小相同的序列,若带型清晰的话,污染的可能性非常的大。
2 ...

P出来的条带还是很清楚的,每次做菌落PCR和提质粒都能P出来,难道是每次都污染了吗?第二个建议是不加模板去P吗
向着前方迈进
6楼2015-05-30 12:59:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a13515517892

木虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币-5, 禁止发布带有商业性质的回帖 2015-06-01 22:56:07
西门吹雪170: 应助指数-1, 屏蔽内容, 禁止发布带有商业性质的回帖 2015-06-01 22:56:30
本帖内容被屏蔽

7楼2015-05-30 13:12:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 雪中花sml at 2015-05-30 12:59:01
P出来的条带还是很清楚的,每次做菌落PCR和提质粒都能P出来,难道是每次都污染了吗?第二个建议是不加模板去P吗...

1.你说每次都能扩出来,那有没有扩不出来的情况呢,还是只要做菌落PCR都能扩出点东西?如果是PCR buffer,Q水一类的污染了的话,那确实每一次都能扩出条带。
2.对,不加模板扩一下看看。
大家相互帮助哈
8楼2015-05-30 13:28:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LuM_QD

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
呵呵,你是做的菌落pcr吗?让大神告诉你为什么吧

[ 发自小木虫客户端 ]
呵呵
9楼2015-05-30 13:55:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 雪中花sml 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 329求调剂,一志愿西北工业大学,材料工程(085601) +3 小小机灵虫 2026-03-29 9/450 2026-03-29 17:39 by 小小机灵虫
[考研] 求调剂 +9 张zz111 2026-03-27 10/500 2026-03-29 14:57 by 唐沐儿
[考研] 299求调剂 +9 15188958825 2026-03-25 9/450 2026-03-29 14:16 by wxiongid
[考研] 332求调剂 +8 蕉蕉123 2026-03-28 8/400 2026-03-29 10:46 by 周梓丹
[硕博家园] 求调剂 有机化学考研356分 +3 Nadiums 2026-03-25 4/200 2026-03-29 00:50 by 544594351
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +4 小张zxy张 2026-03-26 8/400 2026-03-28 19:25 by lbsjt
[考研] 复试调剂 +3 raojunqi0129 2026-03-28 3/150 2026-03-28 15:27 by 落睿可思
[考研] 317求调剂 +6 十闲wx 2026-03-24 6/300 2026-03-28 13:27 by Iveryant
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +8 曼111 2026-03-24 9/450 2026-03-28 07:58 by YYYYX1234
[考研] 085404求调剂,总分309,本科经历较为丰富 +4 来财aa 2026-03-25 4/200 2026-03-28 07:41 by 棒棒球手
[考研] 330一志愿中国海洋大学 化学工程 085602 有读博意愿 求调剂 +3 wywy.. 2026-03-27 4/200 2026-03-28 03:32 by fmesaito
[考研] 279 分 求调剂 +4 睡个好觉_16 2026-03-24 4/200 2026-03-27 15:05 by 醉在风里
[考研] 08开头275求调剂 +4 拉谁不重要 2026-03-26 4/200 2026-03-27 14:12 by Delta2012
[考研] 材料调剂 +8 匹克i 2026-03-23 8/400 2026-03-27 08:11 by hypershenger
[考研] 求调剂,一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +4 @taotao 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:10 by hypershenger
[考研] 317求调剂 +7 蛋黄咸肉粽 2026-03-26 7/350 2026-03-27 02:29 by fmesaito
[考研] 材料调剂 5+4 想要一壶桃花水 2026-03-25 10/500 2026-03-26 19:56 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿哈工大,085400,320,求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 333求调剂 +3 ALULU4408 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:04 by macy2011
[考研] 328求调剂 +4 LHHL66 2026-03-23 4/200 2026-03-23 14:55 by lbsjt
信息提示
请填处理意见