应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 空质粒做PCR也能P出目的条带
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 3236  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

雪中花sml

新虫 (小有名气)

[求助] 空质粒做PCR也能P出目的条带 已有6人参与

最近构建质粒，在筛选的过程中发现空质粒作模板也能P出我的目的基因条带，无法有效筛选重组的质粒，求大神帮忙解决这种问题
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
向着前方迈进
1楼 2015-05-29 19:48:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雪中花sml

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a13515517892 at 2015-05-29 22:45:34
有两种可能：第一你不能肯定P出来的就是你的目的条带把，只是大小差不多（应该没测序验证）可能是载体上的错配，再就是你的pcr产物没连进去，但是在转化的过程中还是和菌混在一起了，也有这种可能P出来，以前也经常 ...

我是每次做菌落PCR和提质粒都能P出来，双酶切就切不开，测序也是空载体
赞一下(1人) 回复此楼
向着前方迈进
5楼2015-05-30 12:56:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-06-01 22:53:04
有两种可能：第一你不能肯定P出来的就是你的目的条带把，只是大小差不多（应该没测序验证）可能是载体上的错配，再就是你的pcr产物没连进去，但是在转化的过程中还是和菌混在一起了，也有这种可能P出来，以前也经常遇到P出来有条带，但是测序是空载的情况，暂时只能这么解释。如果有大神有更好的解释，请告知
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-05-29 22:45:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-06-01 22:54:54
LZ你PCR体系污染的可能性是不小的
1.你最初是想用空载质粒做阴性对照，转化子的筛选是用菌落PCR来做的吧，若以已经提好的空质粒为模板能扩出来与你基因大小相同的序列，若带型清晰的话，污染的可能性非常的大。
2.建议用你补齐PCR体系中所用的dd水做模板做一个阴性对照筛查一下PCR体系是否有污染。
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
3楼2015-05-30 00:22:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小手铐

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-01 22:55:14
我也遇到这种情况，做菌液PCR的时候P不出条带（同时做了阳性对照和阴性对照，阳性的扩出来，阴性的P不出来），然后把P不出来的菌液提质粒，做质粒PCR，可以P出来（也做了阳性和阴性对照，阳性扩出，阴性P不出），最后把质粒送去测序，测序结果是空载。郁闷死了。
赞一下 回复此楼
4楼2015-05-30 09:09:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 356求调剂 +4 gysy?s?a 2026-03-28 4/200 2026-03-29 10:32 by 唐沐儿
[考研] 调剂310 +8 温柔的晚安 2026-03-25 9/450 2026-03-29 08:19 by fmesaito
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学材料与化工方向336分 +9 辰沐5211314 2026-03-26 9/450 2026-03-29 01:12 by 我是小康
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +8 谷雨上岸 2026-03-23 9/450 2026-03-29 01:00 by 我是小康
[考研] 0703化学调剂，求导师收 +9 天天好运来上岸� 2026-03-24 10/500 2026-03-28 22:17 by chemzp
[考研] 332求调剂 +4 @MZB382400 2026-03-28 4/200 2026-03-28 21:02 by 唐沐儿
[考研] 一志愿华理，数一英一285求A区调剂 +8 AZMK 2026-03-25 12/600 2026-03-28 18:15 by AZMK
[考研] 化学0703 调剂 306分 一志愿211 +4 26要上岸 2026-03-28 4/200 2026-03-28 15:30 by 1018329917
[考研] 070300求调剂306分 +4 26要上岸 2026-03-27 4/200 2026-03-28 13:06 by 唐沐儿
[考研] 311求调剂 +9 lin0039 2026-03-26 9/450 2026-03-28 13:05 by 唐沐儿
[考研] 化学调剂 +4 爱吃番茄的旭 2026-03-24 5/250 2026-03-27 17:50 by kiokin
[考研] 085600材料与化工调剂 +10 A-哆啦Z梦 2026-03-23 16/800 2026-03-27 15:13 by caszguilin
[考研] 312求调剂 +9 上岸吧ZJY 2026-03-22 13/650 2026-03-27 11:24 by sanrepian
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料，材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 8/400 2026-03-26 20:34 by Higraduate
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 284求调剂 +15 Zhao anqi 2026-03-22 15/750 2026-03-25 12:51 by wht0531
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗？ +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭