应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 空质粒做PCR也能P出目的条带
141/2返回列表12下一页
查看: 3467  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

雪中花sml

新虫 (小有名气)

[求助] 空质粒做PCR也能P出目的条带 已有6人参与

最近构建质粒，在筛选的过程中发现空质粒作模板也能P出我的目的基因条带，无法有效筛选重组的质粒，求大神帮忙解决这种问题
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
向着前方迈进
1楼 2015-05-29 19:48:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-06-01 22:53:04
有两种可能：第一你不能肯定P出来的就是你的目的条带把，只是大小差不多（应该没测序验证）可能是载体上的错配，再就是你的pcr产物没连进去，但是在转化的过程中还是和菌混在一起了，也有这种可能P出来，以前也经常遇到P出来有条带，但是测序是空载的情况，暂时只能这么解释。如果有大神有更好的解释，请告知
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-05-29 22:45:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雪中花sml

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a13515517892 at 2015-05-29 22:45:34
有两种可能：第一你不能肯定P出来的就是你的目的条带把，只是大小差不多（应该没测序验证）可能是载体上的错配，再就是你的pcr产物没连进去，但是在转化的过程中还是和菌混在一起了，也有这种可能P出来，以前也经常 ...

我是每次做菌落PCR和提质粒都能P出来，双酶切就切不开，测序也是空载体
赞一下(1人) 回复此楼
向着前方迈进
5楼2015-05-30 12:56:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LuM_QD

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-06-01 22:54:21
你做连接的产物里有你的insert，你转化后铺在平板上，你的insert DNA也在平板上，注意哦，大部分的insert没有连上载体里，就这么铺在平板表面，你养了一晚上，这些DNA也没有被降解，所以 很容易pcr出来。建议用载体上的引物试一下，效果会很准确

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
呵呵
10楼2015-05-30 14:01:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-06-01 22:54:54
LZ你PCR体系污染的可能性是不小的
1.你最初是想用空载质粒做阴性对照，转化子的筛选是用菌落PCR来做的吧，若以已经提好的空质粒为模板能扩出来与你基因大小相同的序列，若带型清晰的话，污染的可能性非常的大。
2.建议用你补齐PCR体系中所用的dd水做模板做一个阴性对照筛查一下PCR体系是否有污染。
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
3楼2015-05-30 00:22:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小手铐

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-01 22:55:14
我也遇到这种情况，做菌液PCR的时候P不出条带（同时做了阳性对照和阴性对照，阳性的扩出来，阴性的P不出来），然后把P不出来的菌液提质粒，做质粒PCR，可以P出来（也做了阳性和阴性对照，阳性扩出，阴性P不出），最后把质粒送去测序，测序结果是空载。郁闷死了。
赞一下 回复此楼
4楼2015-05-30 09:09:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雪中花sml

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by luwei13566 at 2015-05-30 00:22:12
LZ你PCR体系污染的可能性是不小的
1.你最初是想用空载质粒做阴性对照，转化子的筛选是用菌落PCR来做的吧，若以已经提好的空质粒为模板能扩出来与你基因大小相同的序列，若带型清晰的话，污染的可能性非常的大。
2 ...

P出来的条带还是很清楚的，每次做菌落PCR和提质粒都能P出来，难道是每次都污染了吗？第二个建议是不加模板去P吗
赞一下 回复此楼
向着前方迈进
6楼2015-05-30 12:59:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a13515517892

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币-5, 禁止发布带有商业性质的回帖 2015-06-01 22:56:07
西门吹雪170: 应助指数-1, 屏蔽内容, 禁止发布带有商业性质的回帖 2015-06-01 22:56:30
本帖内容被屏蔽
7楼2015-05-30 13:12:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 雪中花sml at 2015-05-30 12:59:01
P出来的条带还是很清楚的，每次做菌落PCR和提质粒都能P出来，难道是每次都污染了吗？第二个建议是不加模板去P吗...

1.你说每次都能扩出来，那有没有扩不出来的情况呢，还是只要做菌落PCR都能扩出点东西？如果是PCR buffer，Q水一类的污染了的话，那确实每一次都能扩出条带。
2.对，不加模板扩一下看看。
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
8楼2015-05-30 13:28:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LuM_QD

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
呵呵，你是做的菌落pcr吗？让大神告诉你为什么吧

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
呵呵
9楼2015-05-30 13:55:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 雪中花sml 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 16:25 by Aj1rhIDL5ixY
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:12 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:00 by Aj1rhIDL5ixY
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-14 15:57 by Aj1rhIDL5ixY
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-14 15:45 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-14 15:21 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 15:13 by Aj1rhIDL5ixY
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 15:01 by Aj1rhIDL5ixY
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-14 15:00 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 12:35 by 40ms4Wlo4umh
[基金申请] 求教各位大神：2026教育部人文社科青年基金项目何时公示呀？ +5 云宴山人 2026-09-10 7/350 2026-09-14 12:11 by ecnu2013
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +6 recruit123 2026-09-09 6/300 2026-09-14 12:00 by 萨仁其其格
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 10:11 by 23jxep3nCNZb
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 10:01 by 23jxep3nCNZb
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
[基金申请] 面上有专家说实验设备不是我们单位的 +6 zj_muchong 2026-09-08 8/400 2026-09-11 06:56 by suifengdao
[有机交流] 科研求助 10+4 我吃一只鱼 2026-09-07 4/200 2026-09-10 08:32 by 0940628
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭