24小时热门版块排行榜    

查看: 3455  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

雪中花sml

新虫 (小有名气)

[求助] 空质粒做PCR也能P出目的条带 已有6人参与

最近构建质粒,在筛选的过程中发现空质粒作模板也能P出我的目的基因条带,无法有效筛选重组的质粒,求大神帮忙解决这种问题
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

向着前方迈进
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LuM_QD

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-06-01 22:54:21
你做连接的产物里有你的insert,你转化后铺在平板上,你的insert DNA也在平板上,注意哦,大部分的insert没有连上载体里,就这么铺在平板表面,你养了一晚上,这些DNA也没有被降解,所以 很容易pcr出来。建议用载体上的引物试一下,效果会很准确

[ 发自小木虫客户端 ]
呵呵
10楼2015-05-30 14:01:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-06-01 22:53:04
有两种可能:第一你不能肯定P出来的就是你的目的条带把,只是大小差不多(应该没测序验证)可能是载体上的错配,再就是你的pcr产物没连进去,但是在转化的过程中还是和菌混在一起了,也有这种可能P出来,以前也经常遇到P出来有条带,但是测序是空载的情况,暂时只能这么解释。如果有大神有更好的解释,请告知
2楼2015-05-29 22:45:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-06-01 22:54:54
LZ你PCR体系污染的可能性是不小的
1.你最初是想用空载质粒做阴性对照,转化子的筛选是用菌落PCR来做的吧,若以已经提好的空质粒为模板能扩出来与你基因大小相同的序列,若带型清晰的话,污染的可能性非常的大。
2.建议用你补齐PCR体系中所用的dd水做模板做一个阴性对照筛查一下PCR体系是否有污染。
大家相互帮助哈
3楼2015-05-30 00:22:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小手铐

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-06-01 22:55:14
我也遇到这种情况,做菌液PCR的时候P不出条带(同时做了阳性对照和阴性对照,阳性的扩出来,阴性的P不出来),然后把P不出来的菌液提质粒,做质粒PCR,可以P出来(也做了阳性和阴性对照,阳性扩出,阴性P不出),最后把质粒送去测序,测序结果是空载。郁闷死了。
4楼2015-05-30 09:09:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +7 ziyangfang 2026-08-25 10/500 2026-09-01 09:32 by qvbaoxiao
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+3 Tsingking1 2026-08-27 14/700 2026-09-01 08:29 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
信息提示
请填处理意见