应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 中高拷贝重组载体酶切验证正确，但是提出的质粒浓度一直很低
51/1返回列表
查看: 1917  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

潇潇溪

新虫 (初入文坛)

[求助] 中高拷贝重组载体酶切验证正确，但是提出的质粒浓度一直很低 已有4人参与

一个1000bp左右的条带连接到pQE30 载体上，菌落PCR验证正确，摇菌后提取质粒浓度很淡，但是酶切验证都正确。质粒浓度一直很淡，菌划线后重新挑取单菌落再提质粒还是很淡。且此片段连接过T载体，也是一样的情况。真是从来没有见过这种情况。请各位大侠帮帮找找问题。

中高拷贝重组载体酶切验证正确，但是提出的质粒浓度一直很低
20150430 pQE30-HA1 酶切验证.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-05-05 13:40:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

潇潇溪

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by nemo88 at 2015-05-05 14:20:25
操作手段上，多摇点菌，裂解，离心去沉淀后，然后整个一个管子里提取

不知道PQE载体哪个系列，记得好像PBR系列复制子的质粒可以加氯霉素刺激质粒复制。。。

有考虑过这样来扩大培养，但是pQE30属于中高拷贝质粒，理论上5ml菌液提出的质粒也该有T载体亮度的80%。氯霉素刺激质粒复制这一说法我有听说过，目前没有试过，如果我新的办法还不行，会考虑这样做。
赞一下 回复此楼
6楼2015-05-05 16:47:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

nemo88

禁虫 (小有名气)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-05 22:36:51
潇潇溪: 金币+1, ★有帮助 2015-05-06 11:16:13
本帖内容被屏蔽
2楼2015-05-05 14:20:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sh_9153

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-05 22:37:10
质粒过大影响拷贝数吧，加大一下摇菌体系，多收集几管然后合起来，浓度过低加一步沉淀
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2015-05-05 15:07:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzheng29

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的DNA插入片段对宿主细胞的生长有没有妨碍？
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2015-05-05 15:17:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 284求调剂 +8 天下熯 2026-02-28 8/400 2026-03-02 00:15 by 暮雨星晴
[基金申请] 本子写完了，给DS兄弟看了，得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[考研] 0856材料与化工，270求调剂 +6 YXCT 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:21 by 向上的胖东
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 0805总分292，求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂； 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭