应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切问题，急~
221/3返回列表123下一页
查看: 1976  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lilylil

铁虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切问题，急~ 已有18人参与

本人现在用Not I 和EcoR I 双酶切，目的片段60bp,载体是PUC57总是显示一条带，用酶各自单切都可切开，用的是Takara的酶。
反应体系1μl Not I
              1μl EcoR I
              4μl 0.1% BSA
              4μl 10×H
              25μl 质粒（≤1μg）
              5μl    水
37℃，3h
现在实验就卡在这了，很急请大家多多指导
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-05-04 16:27:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-04 23:20:02
可以尝试一下高浓度的胶，不过中间片段只有60bp的话很难看出来……可以用没有切过的载体做对照。祝顺利！
赞一下(1人) 回复此楼
他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
3楼2015-05-04 16:53:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我切过80BP的，跑电泳看不出来，但质粒确实切开了，后来也连上了。
赞一下 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2015-05-04 16:41:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沉默的独角兽

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会是两个酶切位点靠得太近？
赞一下 回复此楼
4楼2015-05-04 18:04:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

荣誉版主 (知名作家)

优秀版主
感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
赞一下
5楼2015-05-04 18:11:40
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

cckk_2000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lilylil(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-06 19:29:50
你的载体一般都是上万bp，切掉60bp的话，它本身分子量没有太大影响，而且60根本在电泳中看不见，原因是结合的荧光染料太少了。你可以连接、转化挑克隆去测序。
赞一下 回复此楼
科研炮灰
6楼2015-05-05 10:42:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

viki_MDK

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
60bp的 片段短，胶上容易跑出去，，还有一点，60bp片段占质粒分子才多少？估计就几十分之一，大片段的几十分之一的浓度，你觉得会有多明显？
赞一下 回复此楼
7楼2015-05-05 11:01:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

632362481

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
60bp片段太小了，建议做胶的时候密度大点。
赞一下 回复此楼
。。。
8楼2015-05-05 11:41:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jingyu501

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
9楼2015-05-05 12:31:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang6871

银虫 (正式写手)
一般情况下60bp很难观测到的。
赞一下 回复此楼
过于功利，浮躁，布满灰尘的心都是创新的杀手!多记，心静，多动手，贴近大自然!
10楼2015-05-06 11:19:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lilylil 的主题更新
221/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭