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lilylil

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 39.7
帖子: 50
在线: 57.5小时
虫号: 3013961
注册: 2014-03-03
性别: MM
专业: 兽医免疫学

[求助] 双酶切问题，急~ 已有18人参与

本人现在用Not I 和EcoR I 双酶切，目的片段60bp,载体是PUC57总是显示一条带，用酶各自单切都可切开，用的是Takara的酶。
反应体系1μl Not I
            1μl EcoR I
            4μl 0.1% BSA
            4μl 10×H
            25μl 质粒（≤1μg）
            5μl 水
37℃，3h
现在实验就卡在这了，很急请大家多多指导

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1楼 2015-05-04 16:27:42

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沉默的独角兽

金虫 (正式写手)

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专业: 植物病理学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

会不会是两个酶切位点靠得太近？

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4楼2015-05-04 18:04:15

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781055707

木虫 (著名写手)

应助: 291 (大学生)
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性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

我切过80BP的，跑电泳看不出来，但质粒确实切开了，后来也连上了。

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采菊东篱下，悠然见南山。

2楼2015-05-04 16:41:56

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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

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【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-04 23:20:02

可以尝试一下高浓度的胶，不过中间片段只有60bp的话很难看出来……可以用没有切过的载体做对照。祝顺利！

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他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！

3楼2015-05-04 16:53:05

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匿名

荣誉版主 (知名作家)

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5楼2015-05-04 18:11:40

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