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湖畔狂想

金虫 (小有名气)

[求助] 双酶切图片,不知道切没切开,求指教。 已有4人参与

酶切的表达载体
左一是15000marker,左二、左三都是酶切的图片,右一是没有酶切的质粒。


现在遇到的问题就是酶切的第一条带比质粒的第一条带略高;而酶切的第二条带比质粒的第二条带略低。
我感觉是切成功了,但是没有切完全。
理由如下:1、酶切的第二条带亮度大约是质粒两条带亮度的和。
                 2、位置略低,与之前实验室做过酶切的位置很像。

希望大家多提意见,非常感谢!
双酶切图片,不知道切没切开,求指教。
表达载体酶切atpG-2013.12.28.JPG
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-28 21:03:49
你的酶切是只把载体切成线性还是会切下一段小片段?最好再加上以分别单酶切做对照。
2楼2013-12-28 15:43:52
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-28 21:03:57
首先建议你把胶跑时间再长些,另外你酶切之后片段大小是多少?单看你的图片像是被切开。
hehe
3楼2013-12-28 15:47:21
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luwei13566

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-29 16:08:28
你的质粒要有多大啊?建议你用0.8%——1%的琼脂糖电泳~~~你的Marker是什么?你点的这个marker对你这个质粒没有指示作用~~,建议用handIII做marker
大家相互帮助哈
4楼2013-12-28 23:02:17
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木vs木

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
感觉切开了低浓度的胶多跑点时间

[ 发自小木虫客户端 ]
坚持就是胜利!
5楼2013-12-29 01:41:47
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感谢分享感谢分享
6楼2013-12-30 19:22:09
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fochao

禁虫 (著名写手)


gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2013-12-31 00:49:24
本帖内容被屏蔽

7楼2013-12-30 19:34:28
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狼行成单

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-31 00:49:32
是不是切下来的片段很小?环状质粒跑的肯定比线性化的快一点点,如果双酶切片段能够检测到,可以检测下酶切产物。
感觉Marker下面的条带都跑出去了,可以试下用2.0%的胶检测下
If you feel good,doit!
8楼2013-12-30 19:57:02
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意萧02

木虫 (正式写手)

楼主还是很牛的,好好加油,必能成功
9楼2013-12-31 09:23:48
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qinchunjing

银虫 (初入文坛)


gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-01-29 17:03:07
应该做个单酶切的对照,另外可以在质粒上找个离得远些的酶切位点进行酶切,这样切出来结果更明了。
每天进步一点点
10楼2013-12-31 10:47:48
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