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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切图片，不知道切没切开，求指教。
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湖畔狂想

金虫 (小有名气)

[求助] 双酶切图片，不知道切没切开，求指教。 已有4人参与

酶切的表达载体
左一是15000marker，左二、左三都是酶切的图片，右一是没有酶切的质粒。


现在遇到的问题就是酶切的第一条带比质粒的第一条带略高；而酶切的第二条带比质粒的第二条带略低。
我感觉是切成功了，但是没有切完全。
理由如下：1、酶切的第二条带亮度大约是质粒两条带亮度的和。
                 2、位置略低，与之前实验室做过酶切的位置很像。

希望大家多提意见，非常感谢！
双酶切图片，不知道切没切开，求指教。
表达载体酶切atpG-2013.12.28.JPG
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1楼 2013-12-28 14:14:27
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-28 21:03:49
你的酶切是只把载体切成线性还是会切下一段小片段？最好再加上以分别单酶切做对照。
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2楼2013-12-28 15:43:52
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-28 21:03:57
首先建议你把胶跑时间再长些，另外你酶切之后片段大小是多少？单看你的图片像是被切开。
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hehe
3楼2013-12-28 15:47:21
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luwei13566

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-29 16:08:28
你的质粒要有多大啊？建议你用0.8%——1%的琼脂糖电泳~~~你的Marker是什么？你点的这个marker对你这个质粒没有指示作用~~，建议用handIII做marker
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大家相互帮助哈
4楼2013-12-28 23:02:17
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木vs木

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
感觉切开了低浓度的胶多跑点时间

[ 发自小木虫客户端 ]
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坚持就是胜利！
5楼2013-12-29 01:41:47
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阿凡的小开
感谢分享感谢分享
6楼2013-12-30 19:22:09
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fochao

禁虫 (著名写手)
★
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-12-31 00:49:24
本帖内容被屏蔽
7楼2013-12-30 19:34:28
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狼行成单

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-31 00:49:32
是不是切下来的片段很小？环状质粒跑的肯定比线性化的快一点点，如果双酶切片段能够检测到，可以检测下酶切产物。
感觉Marker下面的条带都跑出去了，可以试下用2.0%的胶检测下
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If you feel good，doit！
8楼2013-12-30 19:57:02
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意萧02

木虫 (正式写手)
楼主还是很牛的，好好加油，必能成功
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9楼2013-12-31 09:23:48
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qinchunjing

银虫 (初入文坛)
★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-01-29 17:03:07
应该做个单酶切的对照，另外可以在质粒上找个离得远些的酶切位点进行酶切，这样切出来结果更明了。
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每天进步一点点
10楼2013-12-31 10:47:48
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