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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切问题，急~
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踏云逐月

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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lilylil(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-11 17:04:03
先做个连接看看，毕竟60bp太小了，胶上看不见就不一定没切出来！！祝好运！！
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11楼2015-05-06 16:29:58
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chyanqiu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
lilylil(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-11 17:03:54
用高浓度胶跑电泳，不管有没有看到条带，都将对应位置的胶切下来做回收。如果切的量足够，用回收小片的方法回收，应该没问题的。如果实在不放心，可以先测序。有了测序结果再做
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12楼2015-05-08 10:09:10
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393658000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

pUC57  2000多，片段60，大约是33比1，你切340ng质粒出10ng片段   你全部电泳刚好看到模糊的带，你再考虑下你总共的酶切量以及电泳检测的量，  如果不够必然看不到

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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13楼2015-05-08 12:19:18
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mataomatao

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
14楼2015-05-09 09:23:13
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tfytli

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

60bp太短，稍微一跑就跑出去了，你可以切完直接连接，做个对照看看

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最令人信服的话莫过于一本正经的胡说八道，外加一点数据。
15楼2015-05-09 09:49:33
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ccqqsunshine

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你的问题是什么？没有问题啊，结果都正常的啊！往下做啊

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16楼2015-05-09 10:01:48
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王冠傑

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by chyanqiu at 2015-05-08 10:09:10
用高浓度胶跑电泳，不管有没有看到条带，都将对应位置的胶切下来做回收。如果切的量足够，用回收小片的方法回收，应该没问题的。如果实在不放心，可以先测序。有了测序结果再做

切下来，然后再回收跑Page胶可以吗
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17楼2015-05-09 22:03:35
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人车

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

60太小了吧  电泳上很有可能显示不出来的 那你没有连接你的目的基因 之后转化 看看有没有效果呢
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18楼2015-05-11 16:24:18
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aikaifeng

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

60bp很难在胶上显示出来的，条带跑出去了。双酶切挺好切的，放心往下做就行

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19楼2015-05-11 16:43:40
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eva+

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我的是50bp，跑胶也看不出来，卡在那里了。结合染料太少了，看不出来，只能硬着头皮继续了。试剂都被用光了😱

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20楼2015-05-11 17:31:28
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