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五维度的爱

金虫 (小有名气)

[求助] 连接产物转化 已有5人参与

最近做转化时,连接产物转入DH5a,导致培养16个小时后,长出的菌落较小,这是什么原因啊?
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永恒_99

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 浴火月 at 2015-04-30 12:50:25
1.连接不同的载体效率是不一样的,我用的是T载,16度连接过夜。
2.你用的是之前文献报道的方法吗?还是有什么区别~
3.感受态是不是时间久了~
4.后培养22度温度有点低吧,我们都是37度培养的。都是大肠。

你好,我使用的是低拷贝的质粒,不知道这个质粒什么连接条件比较好呢,谢谢。感受态是时间比较长了,只是大家都在用。我转的也是大肠。
9楼2015-04-30 15:31:24
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晓_时

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
五维度的爱: 金币+2, ★★★很有帮助, 验证是正常的 2015-04-30 16:51:04
我的连接产物有7kbp,长了24h之后只有十几个菌落,但是跑胶和测序是成功的。
不知道你的产物多大,如果是比较大长的慢长的小是可以理解的。毕竟你才16h.
既然有菌落那就挑出来验证一下是否成功。
2楼2015-04-29 20:22:09
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永恒_99

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 晓_时 at 2015-04-29 20:22:09
我的连接产物有7kbp,长了24h之后只有十几个菌落,但是跑胶和测序是成功的。
不知道你的产物多大,如果是比较大长的慢长的小是可以理解的。毕竟你才16h.
既然有菌落那就挑出来验证一下是否成功。

您好,最近在做连接转化,但是成功率很低,六个板几乎都不长,最可能是什么原因呢。酶切纯化后有条带,连接是22℃,2h。转化是按照感受态细胞说明书操作的。谢谢。
3楼2015-04-29 22:55:30
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酒家何处

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
五维度的爱: 金币+2, 已经找到原因了,是我们的37恒温箱温度达不到37℃ 2015-04-30 16:52:29
连接时间是不是短了些。要不就是感受态效率不高。16°过夜试试

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-04-30 08:10:55
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