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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接产物转化
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五维度的爱

金虫 (小有名气)

[求助] 连接产物转化 已有5人参与

最近做转化时，连接产物转入DH5a,导致培养16个小时后，长出的菌落较小，这是什么原因啊？
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1楼 2015-04-29 16:17:01
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永恒_99

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晓_时 at 2015-04-29 20:22:09
我的连接产物有7kbp，长了24h之后只有十几个菌落，但是跑胶和测序是成功的。
不知道你的产物多大，如果是比较大长的慢长的小是可以理解的。毕竟你才16h.
既然有菌落那就挑出来验证一下是否成功。

您好，最近在做连接转化，但是成功率很低，六个板几乎都不长，最可能是什么原因呢。酶切纯化后有条带，连接是22℃，2h。转化是按照感受态细胞说明书操作的。谢谢。
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3楼2015-04-29 22:55:30
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晓_时

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
五维度的爱: 金币+2, ★★★很有帮助, 验证是正常的 2015-04-30 16:51:04
我的连接产物有7kbp，长了24h之后只有十几个菌落，但是跑胶和测序是成功的。
不知道你的产物多大，如果是比较大长的慢长的小是可以理解的。毕竟你才16h.
既然有菌落那就挑出来验证一下是否成功。
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2楼2015-04-29 20:22:09
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酒家何处

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
五维度的爱: 金币+2, 已经找到原因了，是我们的37恒温箱温度达不到37℃ 2015-04-30 16:52:29
连接时间是不是短了些。要不就是感受态效率不高。16°过夜试试

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4楼2015-04-30 08:10:55
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hutil1543

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 永恒_99 at 2015-04-29 22:55:30
您好，最近在做连接转化，但是成功率很低，六个板几乎都不长，最可能是什么原因呢。酶切纯化后有条带，连接是22℃，2h。转化是按照感受态细胞说明书操作的。谢谢。...

4度过夜或者16度1小时。你用的连接酶考虑换个品牌，另外可以考虑自己做超级感受态，很容易的。
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5楼2015-04-30 08:36:38
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