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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接产物转化
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五维度的爱

金虫 (小有名气)

[求助] 连接产物转化已有5人参与

最近做转化时，连接产物转入DH5a,导致培养16个小时后，长出的菌落较小，这是什么原因啊？
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1楼2015-04-29 16:17:01
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

酒家何处

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
五维度的爱: 金币+2, 已经找到原因了，是我们的37恒温箱温度达不到37℃ 2015-04-30 16:52:29
连接时间是不是短了些。要不就是感受态效率不高。16°过夜试试

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2015-04-30 08:10:55
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hutil1543

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 永恒_99 at 2015-04-29 22:55:30
您好，最近在做连接转化，但是成功率很低，六个板几乎都不长，最可能是什么原因呢。酶切纯化后有条带，连接是22℃，2h。转化是按照感受态细胞说明书操作的。谢谢。...

4度过夜或者16度1小时。你用的连接酶考虑换个品牌，另外可以考虑自己做超级感受态，很容易的。
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5楼2015-04-30 08:36:38
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浴火月

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.连接不同的载体效率是不一样的，我用的是T载，16度连接过夜。
2.你用的是之前文献报道的方法吗？还是有什么区别~
3.感受态是不是时间久了~
4.后培养22度温度有点低吧，我们都是37度培养的。都是大肠。
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6楼2015-04-30 12:50:25
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弱者退散

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 永恒_99 at 2015-04-29 22:55:30
您好，最近在做连接转化，但是成功率很低，六个板几乎都不长，最可能是什么原因呢。酶切纯化后有条带，连接是22℃，2h。转化是按照感受态细胞说明书操作的。谢谢。...

最可能是转化没做好，转化效率低。建议做个对照组
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7楼2015-04-30 15:12:52
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普通回帖

晓_时

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
五维度的爱: 金币+2, ★★★很有帮助, 验证是正常的 2015-04-30 16:51:04
我的连接产物有7kbp，长了24h之后只有十几个菌落，但是跑胶和测序是成功的。
不知道你的产物多大，如果是比较大长的慢长的小是可以理解的。毕竟你才16h.
既然有菌落那就挑出来验证一下是否成功。
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2楼2015-04-29 20:22:09
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永恒_99

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 晓_时 at 2015-04-29 20:22:09
我的连接产物有7kbp，长了24h之后只有十几个菌落，但是跑胶和测序是成功的。
不知道你的产物多大，如果是比较大长的慢长的小是可以理解的。毕竟你才16h.
既然有菌落那就挑出来验证一下是否成功。

您好，最近在做连接转化，但是成功率很低，六个板几乎都不长，最可能是什么原因呢。酶切纯化后有条带，连接是22℃，2h。转化是按照感受态细胞说明书操作的。谢谢。
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3楼2015-04-29 22:55:30
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永恒_99

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 弱者退散 at 2015-04-30 15:12:52
最可能是转化没做好，转化效率低。建议做个对照组...

您好，对照是转空质粒吗，如果空质粒没有，是不是可以说明感受态有问题的可能性比较大。谢谢
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8楼2015-04-30 15:23:40
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永恒_99

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 浴火月 at 2015-04-30 12:50:25
1.连接不同的载体效率是不一样的，我用的是T载，16度连接过夜。
2.你用的是之前文献报道的方法吗？还是有什么区别~
3.感受态是不是时间久了~
4.后培养22度温度有点低吧，我们都是37度培养的。都是大肠。

你好，我使用的是低拷贝的质粒，不知道这个质粒什么连接条件比较好呢，谢谢。感受态是时间比较长了，只是大家都在用。我转的也是大肠。
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9楼2015-04-30 15:31:24
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五维度的爱

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 永恒_99 at 2015-04-29 22:55:30
您好，最近在做连接转化，但是成功率很低，六个板几乎都不长，最可能是什么原因呢。酶切纯化后有条带，连接是22℃，2h。转化是按照感受态细胞说明书操作的。谢谢。...

为什么不用16℃连接呢
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10楼2015-04-30 16:51:42
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