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KO奋斗

金虫 (正式写手)

[求助] 转化涂板长不出单菌落

pet28a转化,目的基因3000bp。转化单DH5a中十二小时没长单菌落,但是后面会长几个单菌落,镜检菌体形态成球状不是大肠杆菌,重复了几次十几个小时后都会有相同的那种杂菌,连接后都跑了电泳验证连接上了,就是长不出大肠来,卡那抗性的,不知道该怎么办?着急,不吝赐教。谢谢

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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
12小时以后才长得一般就不是目的菌落了,检查下板子有没有拿错抗性的? 质粒有没有错? 转化时应该带着对照质粒一起转比较好
我会绕一个圈,走回到实验室
2楼2013-07-29 11:29:32
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0921060001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
转化的时候最好做一个对照。同时,会不会是菌液太稀了?

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idontknow
3楼2013-07-29 12:11:00
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KO奋斗

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by loveskyzhou at 2013-07-29 11:29:32
12小时以后才长得一般就不是目的菌落了,检查下板子有没有拿错抗性的? 质粒有没有错? 转化时应该带着对照质粒一起转比较好

嗯。我做个对照试试看

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4楼2013-07-29 13:43:36
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KO奋斗

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 0921060001 at 2013-07-29 12:11:00
转化的时候最好做一个对照。同时,会不会是菌液太稀了?

菌液不稀的

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2013-07-29 13:44:19
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xz2001199802

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做转化的良好习惯是,做阳性和阴性对照,那样就很清楚是板子的问题,还是质粒,或者是感受态细胞的问题。
越学越无知
6楼2013-07-29 14:19:42
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
验证链接成功了?怎么验证的?
7楼2013-07-29 15:11:36
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
对照必须做 的,会不会感受态回力不行了
8楼2013-07-29 18:45:35
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lifuzhu3838

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
感觉很有可能是感受态是问题,连接产物还是不要跑电泳了,都转了!
活到老学到老
9楼2013-07-29 20:35:31
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KO奋斗

金虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by hyphen007 at 2013-07-29 18:45:35
对照必须做 的,会不会感受态回力不行了

感受态应该没问题,别人用过的

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10楼2013-07-30 00:35:21
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