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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化涂板长不出单菌落
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木笑子

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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也许没转进去，或者是连接不成功。
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11楼2013-07-30 09:57:19
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lloveyr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2013-07-31 13:57:45
pet28b本来就挺大个质粒，然后连接3000bp的片段，这个片段也很大，问题就有了：1、片段太长，连接有难度。建议加大片段的用量，连接体系不要做得很大，最多10ul，也不要去电泳了，直接转吧。2、连结后质粒大，教难转化成功。建议：用新鲜制作的感受态。如果实在转不出来，建议用电转化。
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12楼2013-07-30 10:03:26
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maidi12

禁虫 (小有名气)
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13楼2013-07-31 11:25:41
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929519755

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
转化的时候可以多加点质粒，可能是质粒浓度过低……
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想你没话说
14楼2013-07-31 17:42:22
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damaomao

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
15楼2013-07-31 17:57:23
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weleozhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我才做了一个pet28a的转化，目的片段是1K左右，连了两次才成功，第二次长的菌落也比较少，这个载体连大片段有难度，如果你排除了平板和感受态的问题，你可以加大一下片段的量，加长一下热激时间试一下，也可以加大酶量，在整个体系中加大载体和片度的量减少水，或许会好点。
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16楼2013-07-31 23:05:37
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Z深白色J

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xz2001199802 at 2013-07-29 14:19:42
做转化的良好习惯是，做阳性和阴性对照，那样就很清楚是板子的问题，还是质粒，或者是感受态细胞的问题。

能不能说的具体点，怎么做对照？我是初学者，求助
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17楼2014-06-14 19:42:34
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asdqwer1234

新虫 (小有名气)
引用回帖:
1楼: Originally posted by KO奋斗 at 2013-07-29 11:20:52
pet28a转化，目的基因3000bp。转化单DH5a中十二小时没长单菌落，但是后面会长几个单菌落，镜检菌体形态成球状不是大肠杆菌，重复了几次十几个小时后都会有相同的那种杂菌，连接后都跑了电泳验证连接上了，就是长不出 ...

楼主当时有没有解决了问题呀，我现在也遇到了这样的问题，目的基因900bp，连在pet28上，提出质粒，测序正确，转bl21长不出单斑

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18楼2017-04-01 09:02:16
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