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KO奋斗

金虫 (正式写手)

应助: 5 (幼儿园)
金币: 3436.6
红花: 1
帖子: 309
在线: 127.3小时
虫号: 1508203
注册: 2011-11-24
性别: GG
专业: 蛋白质组学

[求助] 转化涂板长不出单菌落

pet28a转化，目的基因3000bp。转化单DH5a中十二小时没长单菌落，但是后面会长几个单菌落，镜检菌体形态成球状不是大肠杆菌，重复了几次十几个小时后都会有相同的那种杂菌，连接后都跑了电泳验证连接上了，就是长不出大肠来，卡那抗性的，不知道该怎么办？着急，不吝赐教。谢谢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

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1楼 2013-07-29 11:20:52

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weleozhu

银虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
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注册: 2012-09-05
专业: 作物种质资源与遗传育种学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

我才做了一个pet28a的转化，目的片段是1K左右，连了两次才成功，第二次长的菌落也比较少，这个载体连大片段有难度，如果你排除了平板和感受态的问题，你可以加大一下片段的量，加长一下热激时间试一下，也可以加大酶量，在整个体系中加大载体和片度的量减少水，或许会好点。

16楼2013-07-31 23:05:37

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