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wmhye

金虫 (小有名气)

[求助] 感受态转化后,没有出现单菌落但菌长了一大片

感受态转化后,没有出现单菌落但菌长了一大片,验证了一下是不是抗生素Kana(与培养基1:1000的比例)失效了,用100 微升的BL21原菌株涂平板,长了20多个单菌落。後来用新买的Kana试了,还是长了单菌落,求高人指点一样,这是什么原因?
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爱海洋,更爱生物
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bingdong05

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-04-26 21:57:04
1)怀疑BL21原菌株被污染:可取bl21菌株接至含有抗生素的液体lb中,过夜,看是否生长
2)若菌株未被污染,向培养基中添加抗生素时等培养基温度降至40度左右再添加;转化子在sos培养基中培养一小时后,不要离心,先取100ul徒步平板,剩下的离心,去上清至100ul,徒步平板,另外:未转化的感受态,培养1h后,涂布含有抗生素的平板;第二天观察几个平板菌落的生长情况,看感受态是否被污染还是转化率过高所致。

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4楼2013-03-28 16:44:54
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佛法无边

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2013-04-26 21:57:20
这种情况应该多做几组对照
1转化目的质粒+kana
2空感受态细胞+kana
3转化其他良好的已知质粒(当然抗性一样)+kana
4空感受态细胞 无kana
对比看结果来判断是你哪出错了,

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5楼2013-03-28 19:45:55
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cyp1512

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-28 15:54:36
梯度实验测试:先取1ul转化产物稀释到99ul转化复苏的socorLB中,再从这100ul取出10ul稀释到50ul,然后均匀把这两个浓度体积涂板,看看是否还是一大片,如果是单菌落就是转化效率过高,要是还是一片可能就是质粒或者平板,感受态污染

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3楼2013-03-28 14:39:14
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普通回帖

lcat

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-28 15:54:28
wmhye: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢了,去试试这个方法 2013-03-28 21:58:12
100 微升的涂平板长了20多个单菌落,感觉既不正常,也不是抗生素完全失效啊。不知道是不是污染了?建议你分一下原菌株的单菌落,多挑几个后选择确保不在抗性板上生长的存起来,继续往下做。
2楼2013-03-28 14:05:02
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wmhye

金虫 (小有名气)

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引用回帖:
5楼: Originally posted by 佛法无边 at 2013-03-28 19:45:55
这种情况应该多做几组对照
1转化目的质粒+kana
2空感受态细胞+kana
3转化其他良好的已知质粒(当然抗性一样)+kana
4空感受态细胞 无kana
对比看结果来判断是你哪出错了,

我决定再去做一次,如果还不行,就只能这样试了
爱海洋,更爱生物
6楼2013-03-28 22:05:22
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wmhye

金虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by bingdong05 at 2013-03-28 16:44:54
1)怀疑BL21原菌株被污染:可取bl21菌株接至含有抗生素的液体lb中,过夜,看是否生长
2)若菌株未被污染,向培养基中添加抗生素时等培养基温度降至40度左右再添加;转化子在sos培养基中培养一小时后,不要离心,先 ...

我也觉得应该是转化率有点高,上次加了200这次我加了100微升,只能看明天的结果了。谢谢
爱海洋,更爱生物
7楼2013-03-28 22:07:06
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wmhye

金虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by cyp1512 at 2013-03-28 14:39:14
梯度实验测试:先取1ul转化产物稀释到99ul转化复苏的socorLB中,再从这100ul取出10ul稀释到50ul,然后均匀把这两个浓度体积涂板,看看是否还是一大片,如果是单菌落就是转化效率过高,要是还是一片可能就是质粒或者 ...

额。。。好吧,原来需要稀释的,我今天做了一次,少加了一倍的转化产物,看来方法错了。谢谢了
爱海洋,更爱生物
8楼2013-03-28 22:09:35
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longxixi

银虫 (正式写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验! 2013-05-31 18:10:16
楼主是不是你转染用的质粒浓度太大,导致转染效率过高,所以长出来的其实是单菌落,但是由于菌过多,看起来不是单菌落!我也遇到过,后来把原质粒稀释后就好了!

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9楼2013-03-29 14:26:15
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wmhye

金虫 (小有名气)

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引用回帖:
9楼: Originally posted by longxixi at 2013-03-29 14:26:15
楼主是不是你转染用的质粒浓度太大,导致转染效率过高,所以长出来的其实是单菌落,但是由于菌过多,看起来不是单菌落!我也遇到过,后来把原质粒稀释后就好了!

谢谢提醒
爱海洋,更爱生物
10楼2013-03-30 11:43:36
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