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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 感受态转化后，没有出现单菌落但菌长了一大片
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wmhye

金虫 (小有名气)

[求助] 感受态转化后，没有出现单菌落但菌长了一大片

感受态转化后，没有出现单菌落但菌长了一大片，验证了一下是不是抗生素Kana（与培养基1:1000的比例）失效了，用100 微升的BL21原菌株涂平板，长了20多个单菌落。後来用新买的Kana试了，还是长了单菌落，求高人指点一样，这是什么原因？
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爱海洋，更爱生物
1楼 2013-03-27 22:32:44
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

bingdong05

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-04-26 21:57:04
1）怀疑BL21原菌株被污染：可取bl21菌株接至含有抗生素的液体lb中，过夜，看是否生长
2）若菌株未被污染，向培养基中添加抗生素时等培养基温度降至40度左右再添加；转化子在sos培养基中培养一小时后，不要离心，先取100ul徒步平板，剩下的离心，去上清至100ul，徒步平板，另外：未转化的感受态，培养1h后，涂布含有抗生素的平板；第二天观察几个平板菌落的生长情况，看感受态是否被污染还是转化率过高所致。
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wmhye
4楼2013-03-28 16:44:54
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佛法无边

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-04-26 21:57:20
这种情况应该多做几组对照
1转化目的质粒+kana
2空感受态细胞+kana
3转化其他良好的已知质粒（当然抗性一样）+kana
4空感受态细胞 无kana
对比看结果来判断是你哪出错了，
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wmhye
5楼2013-03-28 19:45:55
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cyp1512

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-28 15:54:36
梯度实验测试：先取1ul转化产物稀释到99ul转化复苏的socorLB中，再从这100ul取出10ul稀释到50ul，然后均匀把这两个浓度体积涂板，看看是否还是一大片，如果是单菌落就是转化效率过高，要是还是一片可能就是质粒或者平板，感受态污染
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wmhye
3楼2013-03-28 14:39:14
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普通回帖

lcat

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-03-28 15:54:28
wmhye: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢了，去试试这个方法 2013-03-28 21:58:12
100 微升的涂平板长了20多个单菌落，感觉既不正常，也不是抗生素完全失效啊。不知道是不是污染了？建议你分一下原菌株的单菌落，多挑几个后选择确保不在抗性板上生长的存起来，继续往下做。
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2楼2013-03-28 14:05:02
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wmhye

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 佛法无边 at 2013-03-28 19:45:55
这种情况应该多做几组对照
1转化目的质粒+kana
2空感受态细胞+kana
3转化其他良好的已知质粒（当然抗性一样）+kana
4空感受态细胞 无kana
对比看结果来判断是你哪出错了，

我决定再去做一次，如果还不行，就只能这样试了
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爱海洋，更爱生物
6楼2013-03-28 22:05:22
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wmhye

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by bingdong05 at 2013-03-28 16:44:54
1）怀疑BL21原菌株被污染：可取bl21菌株接至含有抗生素的液体lb中，过夜，看是否生长
2）若菌株未被污染，向培养基中添加抗生素时等培养基温度降至40度左右再添加；转化子在sos培养基中培养一小时后，不要离心，先 ...

我也觉得应该是转化率有点高，上次加了200这次我加了100微升，只能看明天的结果了。谢谢
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爱海洋，更爱生物
7楼2013-03-28 22:07:06
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wmhye

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by cyp1512 at 2013-03-28 14:39:14
梯度实验测试：先取1ul转化产物稀释到99ul转化复苏的socorLB中，再从这100ul取出10ul稀释到50ul，然后均匀把这两个浓度体积涂板，看看是否还是一大片，如果是单菌落就是转化效率过高，要是还是一片可能就是质粒或者 ...

额。。。好吧，原来需要稀释的，我今天做了一次，少加了一倍的转化产物，看来方法错了。谢谢了
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爱海洋，更爱生物
8楼2013-03-28 22:09:35
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longxixi

银虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-05-31 18:10:16
楼主是不是你转染用的质粒浓度太大，导致转染效率过高，所以长出来的其实是单菌落，但是由于菌过多，看起来不是单菌落！我也遇到过，后来把原质粒稀释后就好了！
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wmhye
9楼2013-03-29 14:26:15
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wmhye

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by longxixi at 2013-03-29 14:26:15
楼主是不是你转染用的质粒浓度太大，导致转染效率过高，所以长出来的其实是单菌落，但是由于菌过多，看起来不是单菌落！我也遇到过，后来把原质粒稀释后就好了！

谢谢提醒
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爱海洋，更爱生物
10楼2013-03-30 11:43:36
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