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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化涂板长不出单菌落
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KO奋斗

金虫 (正式写手)

[求助] 转化涂板长不出单菌落

pet28a转化，目的基因3000bp。转化单DH5a中十二小时没长单菌落，但是后面会长几个单菌落，镜检菌体形态成球状不是大肠杆菌，重复了几次十几个小时后都会有相同的那种杂菌，连接后都跑了电泳验证连接上了，就是长不出大肠来，卡那抗性的，不知道该怎么办？着急，不吝赐教。谢谢

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1楼 2013-07-29 11:20:52
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
12小时以后才长得一般就不是目的菌落了，检查下板子有没有拿错抗性的？ 质粒有没有错？ 转化时应该带着对照质粒一起转比较好
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我会绕一个圈，走回到实验室
2楼2013-07-29 11:29:32
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0921060001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
转化的时候最好做一个对照。同时，会不会是菌液太稀了？

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idontknow
3楼2013-07-29 12:11:00
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KO奋斗

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by loveskyzhou at 2013-07-29 11:29:32
12小时以后才长得一般就不是目的菌落了，检查下板子有没有拿错抗性的？ 质粒有没有错？ 转化时应该带着对照质粒一起转比较好

嗯。我做个对照试试看

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4楼2013-07-29 13:43:36
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KO奋斗

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 0921060001 at 2013-07-29 12:11:00
转化的时候最好做一个对照。同时，会不会是菌液太稀了？

菌液不稀的

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5楼2013-07-29 13:44:19
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xz2001199802

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做转化的良好习惯是，做阳性和阴性对照，那样就很清楚是板子的问题，还是质粒，或者是感受态细胞的问题。
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越学越无知
6楼2013-07-29 14:19:42
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wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
验证链接成功了？怎么验证的？
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7楼2013-07-29 15:11:36
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
对照必须做 的，会不会感受态回力不行了
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8楼2013-07-29 18:45:35
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lifuzhu3838

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉很有可能是感受态是问题，连接产物还是不要跑电泳了，都转了！
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活到老学到老
9楼2013-07-29 20:35:31
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KO奋斗

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by hyphen007 at 2013-07-29 18:45:35
对照必须做 的，会不会感受态回力不行了

感受态应该没问题，别人用过的

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10楼2013-07-30 00:35:21
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