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juan_819

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 本人分子生物小白一枚，刚刚开始做pcr，目前在扩cDNA的全长。。。已有4人参与

我已经设计了两对引物。第一对做的不太成功。第二对今天早上做了一下可以扩出来一些。在1500bp附近有我需要的目的基因，但是我用早上的产物做二次扩增的时候却怎么也做不出来了。只有引物二聚体。想问一下，如果改用LAtaq酶会不会效果好一些，在引物、镁离子等浓度上有什么需要注意的地方，希望各位指点一下，谢谢。

上午做梯度的结果

用第四第五管做二次pcr的结果

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1楼 2015-04-15 16:44:41

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慕辰sherry

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

7楼: Originally posted by Sunshine092 at 2015-04-15 18:00:57
我用的体系是50μl
ddH2O 36.5μl
Buffer（Mg2+ plus） 5μl
dNTP (2.5mmol/L) 4μl
引物F(10μmol/L) 1μl
   R 1μl
rTaq (5U/μl)    0.5μl
cDNA    2μl
我用的Buffer里有镁离子 cD ...

稀释的话是用双蒸水吗我用的是师姐之前做ITS2的条件所以很多地方还需要在摸索一下。我再改改吧 LAtaq可以用么