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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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cui00008

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】逆转录第一链cDNA是否成功了,帮忙看一下 已有4人参与

图1,是用clontech的smart  race试剂盒反转录的第一链cDNA直接电泳的,marker后空了一个,后面有四个空点样,分别是试剂盒中参照的5’、3’和样品的5’、3’,图中(拍照不清楚),参照有两条带,样品的5’也有两条,3’基本看不到。第一链cDNA的转录是否成功了,内参是不是可以?


图2,是我用第一链cDNA,PCR后电泳的情况,marker后空了一个,后面有四个空点样,分别是样品5’的两个和3’的两个,都没有条带,不知道怎么回事?(我用提取的基因组dna,pcr是有条带的)


这说明cDNA没转成功,还是转后没有我要的片段?

[ Last edited by cui00008 on 2010-3-29 at 13:48 ]
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

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1949stone(金币+2): 2010-03-29 14:38
你好浪费啊,我用clontech合成的RACE cDNA一点都舍不得用来做电泳检测,我们一般就是拿以前成功的RACE检测一下,我没有发现失败的现象,所以现在都不检测,只要RNA的质量差不多,就不会有问题。
关于你没有跑出来的问题,首先你的引物是按照盒子说明设计的吗?你跑基因组有带是什么意思,用什么程序跑的基因组,怎么跑的,是把3RACE和5RACE引物作为上下游引物跑的吗?另外你的引物会不会是内含子区的?
2楼2010-03-29 14:25:06
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haosmile

金虫 (正式写手)


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同意楼上的
3楼2010-05-16 23:02:01
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
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plantaqp(金币+1):欢迎交流 2010-05-17 04:46:06
反转录的第一链cDNA直接电泳,没有必要!
请优化PCR条件
4楼2010-05-16 23:49:31
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liyong1981

金虫 (正式写手)



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没这个必要把,试剂盒一般米有问题~
5楼2010-05-17 11:12:57
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zcqcau

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
没有必要做第一链cDNA的电泳!!

只要按照说明,一般没什么问题,然后就是后面做特异性扩增就好了
将有能量帮助他人作为自己的人生追求!
6楼2010-05-17 19:38:26
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