应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 直接用DNA为模板进行荧光定量PCR可行吗？
71/1返回列表
查看: 5628  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

纠结的面包

新虫 (初入文坛)

[求助] 直接用DNA为模板进行荧光定量PCR可行吗？ 已有3人参与

作为刚接触分子生物的小白，老板也不太了解荧光定量PCR,只是给出任务说要用类似的方法检测土壤中产CA功能菌及CA表达的变化情况。因为土壤中提取RNA难度太高，所以放弃了检测CA表达量的变化，在看了相关文献后，看到有人说可以直接提取宏基因组，然后以特定功能基因为模板进行PCR之后制作质粒，通过和标准品CT值的对比可以得出功能菌的丰度变化情况，请问可行吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-08 16:22:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biot

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-09-08 20:05:28
纠结的面包: 金币+1 2014-09-13 01:34:43
完全可行，你要提取尽量高质量的DNA，设计好引物，构建好质粒标准品，最后可计算出拷贝数

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
扬帆起航！
2楼2014-09-08 19:58:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

纠结的面包

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biot at 2014-09-08 19:58:38
完全可行，你要提取尽量高质量的DNA，设计好引物，构建好质粒标准品，最后可计算出拷贝数

谢谢！如果可能的话有没有相关的文献推荐？麻烦了
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-09 09:14:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xipha

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-09-09 09:54:04
纠结的面包: 金币+1 2014-09-13 01:34:50
用DNA的话, 测该菌的量是可以的. 如果你的CA(不知道是什么)是蛋白或者功能蛋白产物,用DNA是无法得到表达量变化的.
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-09 09:29:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

纠结的面包

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xipha at 2014-09-09 09:29:27
用DNA的话, 测该菌的量是可以的. 如果你的CA(不知道是什么)是蛋白或者功能蛋白产物,用DNA是无法得到表达量变化的.

CA是碳酸酐酶，老板的意思是既然酶的表达量测定不出来，就想验证下产CA的典型菌的丰度和溶蚀量是不是成正比，目前是在研究一株从当地土壤中筛选出来的细菌，想着设计引物对CA基因进行PCR后制作质粒，通过和标准品曲线的比对得出这种细菌含量随季节的变化，应该是可行的吧？
赞一下 回复此楼
5楼2014-09-09 16:15:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
纠结的面包(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-10 08:44:41
这个很简单：绝对定量
1. 测量300mg土壤，提取DNA。
2. 设计CA（猜测是产甲烷杆菌），的引物，PCR
3. 克隆并测序：将PCR产物电泳，纯化，TA克隆，得到质粒，进行拷贝数换算。
4. qPCR检测，得到具体拷贝数（换算成XX拷贝数/mg土壤）
赞一下 回复此楼
有你真好
6楼2014-09-09 16:19:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xipha

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 纠结的面包 at 2014-09-09 16:15:02
CA是碳酸酐酶，老板的意思是既然酶的表达量测定不出来，就想验证下产CA的典型菌的丰度和溶蚀量是不是成正比，目前是在研究一株从当地土壤中筛选出来的细菌，想着设计引物对CA基因进行PCR后制作质粒，通过和标准品曲 ...

这个事没问题的. 酶的表达量没办法测酶活或者做westernblot么?
赞一下 回复此楼
7楼2014-09-10 08:41:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 纠结的面包 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-15 06:49 by 5BDX0d0WFp7t
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:02 by 5BDX0d0WFp7t
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-15 05:34 by 5BDX0d0WFp7t
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-15 05:00 by mibUvS8DDCwf
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 01:21 by mibUvS8DDCwf
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:25 by mibUvS8DDCwf
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:21 by mibUvS8DDCwf
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:12 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-14 23:21 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-14 22:37 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:25 by vZfe6xYu34yj
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +4 两三岁ss 2026-09-14 4/200 2026-09-14 20:29 by 班主任的同桌
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 18:01 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-14 17:48 by Aj1rhIDL5ixY
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 15:09 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭