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20111987

金虫 (正式写手)

[求助] 做荧光定量PCR操作必须要在冰上进行吗？

做荧光定量PCR操作必须要在冰上进行吗？
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1楼 2012-10-09 09:11:58
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回帖置顶 ( 共有1个 )

ypan

木虫 (著名写手)
20111987: 回帖置顶 2012-10-12 15:05:51
是否需要在冰上操作，需要根据PCR酶。
如果是抗体修饰或者抗体结合的酶，最好在冰上加样，目前大部分用sybr Green做定量的酶（Mix）大多为此种酶，一般热启动时需要2～3分钟；
如果酶是化学修饰（即在编码酶的DNA水平做了改进），室温操作没有问题，这种酶多用于Taqman方法，一般热启动时需要10分钟预热。
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17楼2012-10-12 13:09:06
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普通回帖

wushuwei1104

银虫 (小有名气)
不用，室温就行。跟普通PCR条件无差别。但是要注意环境的清洁，避免不必要的污染干扰实验结果！
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勤能补拙
2楼2012-10-09 09:43:09
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20111987

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-10-09 09:43:09
不用，室温就行。跟普通PCR条件无差别。但是要注意环境的清洁，避免不必要的污染干扰实验结果！

好的，知道了，谢谢，我们实验室没冰，前两次都是到处借冰，楼主试过室温操作能出结果是吗？
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3楼2012-10-09 10:24:04
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
20111987: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-10-09 14:41:41
建议还是在冰上进行，因为你的那个酶是需要在4度保存的，温度过高肯定会有影响的！
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持之以恒、永不放弃！
4楼2012-10-09 10:34:01
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
20111987: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-10-09 14:42:08
不需要。室温操作即可。CHEMICAL的保存可按照说明书，一般是保存于-20度而非4度
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5楼2012-10-09 11:06:41
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wangxin1989

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
20111987: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-10-09 14:42:26
最好在冰上，自我感觉结果差异还是很明显的，用冰！
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有梦就有希望
6楼2012-10-09 11:09:20
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hofo336699

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
20111987: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-10-09 14:42:32
要用冰，温度高了对酶有影响，我们所有的PCR都在冰盒上进行的，
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懒虫啊！
7楼2012-10-09 11:34:43
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”
引用回帖:
5楼: Originally posted by chenguestc at 2012-10-09 11:06:41
不需要。室温操作即可。CHEMICAL的保存可按照说明书，一般是保存于-20度而非4度

那是因为咱们用的酶不一样！
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持之以恒、永不放弃！
8楼2012-10-09 15:44:13
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 20111987 at 2012-10-09 10:24:04
好的，知道了，谢谢，我们实验室没冰，前两次都是到处借冰，楼主试过室温操作能出结果是吗？...

我的荧光实时定量PCR就是在室温操作的，结果挺好的！
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勤能补拙
9楼2012-10-09 16:11:58
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-10-09 10:34:01
建议还是在冰上进行，因为你的那个酶是需要在4度保存的，温度过高肯定会有影响的！

室温不算“温度过高吧”，况且PCR的整个过程都是在较高的温度，聚合酶也没什么问题呀！  如果聚合酶在室温加样的时间都挺不过来的话，那PCR就不用做了！  你说呢！（聚合酶都是耐高温的，94℃变性过程都有问题）
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勤能补拙
10楼2012-10-09 16:14:14
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