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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做荧光定量PCR操作必须要在冰上进行吗？
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青豆同学

铜虫 (正式写手)
Taq聚合酶耐高温，如果就是操作这点时间的话，常温没问题。当然了，放冰上肯定会好点，酶活会高点，但不会有很大差异
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谢谢你给我信心与力量，我会努力！
11楼2012-10-09 19:51:42
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我是小纯洁

金虫 (正式写手)
荧光定量的酶一般都是加热才会释放的酶，所以没什么关系、
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12楼2012-10-10 11:26:37
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小小微生物

金虫 (正式写手)
我都是最后一步加酶  所以都不用冰  效果也很好
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13楼2012-10-10 19:48:02
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六妖妖

金虫 (正式写手)
一次做的样品不多的话不用冰也没太大关系。现在qPCR的mix都是抗体修饰的多，常温下影响不大的。如果一次做96孔板或者384板最好还是用冰好点。不然先加的样品背景信号会偏高
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14楼2012-10-11 15:50:26
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枫萧

铜虫 (小有名气)
我们实验室一般都是在冰上操作的！
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15楼2012-10-12 09:22:57
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xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)
如果你加样的时间挺长的，最好冰上吧。像大冬天的，就可以直接在工作台上了
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16楼2012-10-12 09:39:05
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ypan

木虫 (著名写手)
20111987: 回帖置顶 2012-10-12 15:05:51
是否需要在冰上操作，需要根据PCR酶。
如果是抗体修饰或者抗体结合的酶，最好在冰上加样，目前大部分用sybr Green做定量的酶（Mix）大多为此种酶，一般热启动时需要2～3分钟；
如果酶是化学修饰（即在编码酶的DNA水平做了改进），室温操作没有问题，这种酶多用于Taqman方法，一般热启动时需要10分钟预热。
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17楼2012-10-12 13:09:06
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muyangnan

新虫 (初入文坛)
在冰上可以减少样品挥发，分子运动小，污染小，产生气溶胶污染也较少
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18楼2016-03-01 16:18:11
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jackyoung

新虫 (正式写手)
我也是醉了

发自小木虫Android客户端
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CestLaVie
19楼2016-03-02 08:43:50
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