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青豆同学

铜虫 (正式写手)

Taq聚合酶耐高温,如果就是操作这点时间的话,常温没问题。当然了,放冰上肯定会好点,酶活会高点,但不会有很大差异
谢谢你给我信心与力量,我会努力!
11楼2012-10-09 19:51:42
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我是小纯洁

金虫 (正式写手)

荧光定量的酶一般都是加热才会释放的酶,所以没什么关系、
12楼2012-10-10 11:26:37
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小小微生物

金虫 (正式写手)

我都是最后一步加酶  所以都不用冰  效果也很好
13楼2012-10-10 19:48:02
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六妖妖

金虫 (正式写手)

一次做的样品不多的话不用冰也没太大关系。现在qPCR的mix都是抗体修饰的多,常温下影响不大的。如果一次做96孔板或者384板最好还是用冰好点。不然先加的样品背景信号会偏高
14楼2012-10-11 15:50:26
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枫萧

铜虫 (小有名气)

我们实验室一般都是在冰上操作的!
15楼2012-10-12 09:22:57
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xiazhiwuxie

银虫 (小有名气)

如果你加样的时间挺长的,最好冰上吧。像大冬天的,就可以直接在工作台上了
16楼2012-10-12 09:39:05
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ypan

木虫 (著名写手)

20111987: 回帖置顶 2012-10-12 15:05:51
是否需要在冰上操作,需要根据PCR酶。
如果是抗体修饰或者抗体结合的酶,最好在冰上加样,目前大部分用sybr Green做定量的酶(Mix)大多为此种酶,一般热启动时需要2~3分钟;
如果酶是化学修饰(即在编码酶的DNA水平做了改进),室温操作没有问题,这种酶多用于Taqman方法,一般热启动时需要10分钟预热。
17楼2012-10-12 13:09:06
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muyangnan

新虫 (初入文坛)

在冰上可以减少样品挥发,分子运动小,污染小,产生气溶胶污染也较少
18楼2016-03-01 16:18:11
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jackyoung

新虫 (正式写手)

CestLaVie
19楼2016-03-02 08:43:50
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