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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做荧光定量PCR操作必须要在冰上进行吗？
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20111987

金虫 (正式写手)

[求助] 做荧光定量PCR操作必须要在冰上进行吗？

做荧光定量PCR操作必须要在冰上进行吗？
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1楼 2012-10-09 09:11:58
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ypan

木虫 (著名写手)
20111987: 回帖置顶 2012-10-12 15:05:51
是否需要在冰上操作，需要根据PCR酶。
如果是抗体修饰或者抗体结合的酶，最好在冰上加样，目前大部分用sybr Green做定量的酶（Mix）大多为此种酶，一般热启动时需要2～3分钟；
如果酶是化学修饰（即在编码酶的DNA水平做了改进），室温操作没有问题，这种酶多用于Taqman方法，一般热启动时需要10分钟预热。
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17楼2012-10-12 13:09:06
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wushuwei1104

银虫 (小有名气)
不用，室温就行。跟普通PCR条件无差别。但是要注意环境的清洁，避免不必要的污染干扰实验结果！
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勤能补拙
2楼2012-10-09 09:43:09
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20111987

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wushuwei1104 at 2012-10-09 09:43:09
不用，室温就行。跟普通PCR条件无差别。但是要注意环境的清洁，避免不必要的污染干扰实验结果！

好的，知道了，谢谢，我们实验室没冰，前两次都是到处借冰，楼主试过室温操作能出结果是吗？
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3楼2012-10-09 10:24:04
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
20111987: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-10-09 14:41:41
建议还是在冰上进行，因为你的那个酶是需要在4度保存的，温度过高肯定会有影响的！
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持之以恒、永不放弃！
4楼2012-10-09 10:34:01
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