应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 直接用DNA为模板进行荧光定量PCR可行吗？
71/1返回列表
查看: 5535  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

纠结的面包

新虫 (初入文坛)

[求助] 直接用DNA为模板进行荧光定量PCR可行吗？ 已有3人参与

作为刚接触分子生物的小白，老板也不太了解荧光定量PCR,只是给出任务说要用类似的方法检测土壤中产CA功能菌及CA表达的变化情况。因为土壤中提取RNA难度太高，所以放弃了检测CA表达量的变化，在看了相关文献后，看到有人说可以直接提取宏基因组，然后以特定功能基因为模板进行PCR之后制作质粒，通过和标准品CT值的对比可以得出功能菌的丰度变化情况，请问可行吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-09-08 16:22:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biot

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-09-08 20:05:28
纠结的面包: 金币+1 2014-09-13 01:34:43
完全可行，你要提取尽量高质量的DNA，设计好引物，构建好质粒标准品，最后可计算出拷贝数

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
扬帆起航！
2楼2014-09-08 19:58:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

纠结的面包

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by biot at 2014-09-08 19:58:38
完全可行，你要提取尽量高质量的DNA，设计好引物，构建好质粒标准品，最后可计算出拷贝数

谢谢！如果可能的话有没有相关的文献推荐？麻烦了
赞一下 回复此楼
3楼2014-09-09 09:14:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xipha

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-09-09 09:54:04
纠结的面包: 金币+1 2014-09-13 01:34:50
用DNA的话, 测该菌的量是可以的. 如果你的CA(不知道是什么)是蛋白或者功能蛋白产物,用DNA是无法得到表达量变化的.
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-09 09:29:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

纠结的面包

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xipha at 2014-09-09 09:29:27
用DNA的话, 测该菌的量是可以的. 如果你的CA(不知道是什么)是蛋白或者功能蛋白产物,用DNA是无法得到表达量变化的.

CA是碳酸酐酶，老板的意思是既然酶的表达量测定不出来，就想验证下产CA的典型菌的丰度和溶蚀量是不是成正比，目前是在研究一株从当地土壤中筛选出来的细菌，想着设计引物对CA基因进行PCR后制作质粒，通过和标准品曲线的比对得出这种细菌含量随季节的变化，应该是可行的吧？
赞一下 回复此楼
5楼2014-09-09 16:15:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a314919473

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
纠结的面包(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-10 08:44:41
这个很简单：绝对定量
1. 测量300mg土壤，提取DNA。
2. 设计CA（猜测是产甲烷杆菌），的引物，PCR
3. 克隆并测序：将PCR产物电泳，纯化，TA克隆，得到质粒，进行拷贝数换算。
4. qPCR检测，得到具体拷贝数（换算成XX拷贝数/mg土壤）
赞一下 回复此楼
有你真好
6楼2014-09-09 16:19:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xipha

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 纠结的面包 at 2014-09-09 16:15:02
CA是碳酸酐酶，老板的意思是既然酶的表达量测定不出来，就想验证下产CA的典型菌的丰度和溶蚀量是不是成正比，目前是在研究一株从当地土壤中筛选出来的细菌，想着设计引物对CA基因进行PCR后制作质粒，通过和标准品曲 ...

这个事没问题的. 酶的表达量没办法测酶活或者做westernblot么?
赞一下 回复此楼
7楼2014-09-10 08:41:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 纠结的面包 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +23 低垂的野花 2026-07-31 31/1550 2026-08-07 12:22 by speculiar
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode变化情况 +3 布布和一二 2026-08-07 9/450 2026-08-07 12:19 by 医学老男孩
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +3 yang182083 2026-08-06 4/200 2026-08-07 11:07 by 虫友是什么虫
[基金申请] 基金中了 +11 laoda193707 2026-08-06 11/550 2026-08-07 10:54 by TT和NN
[基金申请] 听说今天filecode变了 +21 布布和一二 2026-08-06 44/2200 2026-08-07 10:11 by 布布和一二
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +4 archvillain 2026-08-06 8/400 2026-08-07 08:06 by 带你看大海
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 12/600 2026-08-06 15:11 by eddyin
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[论文投稿] 十年后又回来了，论文投稿求助 +3 哈哈114477 2026-08-01 3/150 2026-08-04 15:40 by tegsgjy20
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭